小鼠皮膚無綠藻感染差異表達基因的篩選.pdf

1、第一部分:小鼠皮膚無綠藻感染動物模型的構(gòu)建
　　目的:構(gòu)建小鼠皮膚無綠藻感染模型。
　　方法:BALB/C小鼠分為4組，A組為免疫抑制小鼠，腹部皮下接種1×109孢子數(shù)/ml中型無綠藻波多黎各變種懸液組;B組為免疫抑制小鼠，腹部皮下接種1×106孢子數(shù)/ml懸液組;C組為健康小鼠，腹部皮下接種1×109孢子數(shù)/ml懸液組;D組為對照組，健康小鼠腹部皮下接種生理鹽水溶液，每個部位接種量均為200μl。接種后第7、14、28天時

2、觀察各組小鼠腹部皮損變化，并進行腹部皮膚病理及真菌檢查。
　　結(jié)果:A、B、C組小鼠接種處均出現(xiàn)丘疹、膿腫，部分出現(xiàn)潰瘍、結(jié)痂，感染率均為100％。A、B、C三組小鼠的腹部皮損直徑，組內(nèi)相比，均在第7天時最大(P＜0.05)，分別為(6.75±1.09) mm、(5.88±1.17) mm和(5.96±0.99) mm;組間相比，在接種后第7、14天時，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，在第28天時，A組最大(P＜0.05)為(4

3、.38±0.86) mm。實驗組基本病理改變?yōu)閴乃?、膿腫、肉芽腫形成，HE染色和PAS染色均可見孢子，皮損直接鏡檢可見孢子，培養(yǎng)為無綠藻生長。對照組未感染無綠藻。
　　結(jié)論:腹部皮下接種法可在免疫抑制和健康小鼠成功建立皮膚無綠藻病動物感染模型。
　　第二部分:小鼠皮膚無綠藻感染差異表達基因的篩選
　　目的:利用基因表達譜芯片篩選小鼠感染無綠藻皮膚組織的差異表達基因，探討這些基因在皮膚無綠藻病中的作用，從而對皮膚無綠藻病

4、有更新的認識。
　　方法:分別提取免疫抑制小鼠感染無綠藻的皮膚組織和對照組皮膚組織，抽提總RNA，反轉(zhuǎn)錄成cDNA同時進行單色標(biāo)記，和小鼠全基因組表達譜芯片雜交，經(jīng)過芯片掃描和數(shù)據(jù)處理，分析出差異表達的基因，并對部分差異基因采用實時熒光定量PCR的方法進行驗證。
　　結(jié)果:感染無綠藻的小鼠皮膚組織中表達差異＞2倍的基因共有9902個，其中表達上調(diào)的基因4974個，表達下調(diào)的基因4928個。生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，差異基因功能主要