豬2型鏈球菌體內(nèi)誘導(dǎo)抗原的篩選、鑒定和功能研究.pdf

1、分類號(hào)華中農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文豬2型鏈球菌體內(nèi)誘導(dǎo)抗原的篩選、鑒定和功能研究IdentificationaodPathogenesisstudyof腸ePtoeoceus‘u扮serotyPe2invivoindueedantigen博士研究生指導(dǎo)教師胡巧云陳煥春院士金梅林教授專業(yè):預(yù)防獸醫(yī)學(xué)獲得學(xué)位名稱:農(nóng)學(xué)博士研究方向:動(dòng)物病原微生物學(xué)獲得學(xué)位時(shí)間:2009年12月華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院動(dòng)物醫(yī)學(xué)院二00九年十二月華中農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)

2、位論文2.2.n表達(dá)文庫(kù)的篩選................................................................................……362.2.12熒光定量PCR鑒定篩選出蛋白......................................................……372.3結(jié)果與分析...................................

3、.................................................................……392.3.1基因組文庫(kù)的構(gòu)建...............................................................................……392.3.2文庫(kù)篩選探針的制備.........................................

4、..................................……432.3.3基因組文庫(kù)的篩選...............................................................................……432.3.4驗(yàn)證篩選出的基因.........................................................................

5、......……452.3.5體內(nèi)誘導(dǎo)表達(dá)抗原SspA點(diǎn)雜交與抗體檢測(cè)....................................……462.4討論.............................……，............................................................................……472.4.1體內(nèi)誘導(dǎo)抗原技術(shù)發(fā)掘感染過程中的相關(guān)蛋白...

6、............................……472.4.2體內(nèi)誘導(dǎo)抗原的蛋白的特性分析......................................................……482.4.3體內(nèi)誘導(dǎo)抗原的發(fā)掘?yàn)榧?xì)菌的致病研究提供一些依據(jù)..................……49第三章豬2型鏈球菌枯草菌素樣絲氨酸蛋白酶(Subtilisin一likeserineprotease，sspA)的鑒定和致

7、病功能研究..............................................................................................……503.1前言................................................................................................................

8、……503.2材料與方法....................................................................................................……503.2.1菌株、質(zhì)粒、細(xì)胞及培養(yǎng)條件..........................................................……503.2.2主要試劑及藥品............

9、......................................................................……513.2.3培養(yǎng)基與抗生素及其配制..................................................................……523.2.4緩沖液二、..................................................

10、.............................................……523.2.5弓物......................................................................................................……553.2.6實(shí)驗(yàn)動(dòng)物.................................................

11、.............................................……553.2.7細(xì)菌表面免疫熒光試驗(yàn).................……，..............................................……553.2.8使用熒光定量PCR驗(yàn)證ssPA基因感染豬體內(nèi)的表達(dá)..................……563.2.9凍千豬鏈球菌菌株的復(fù)蘇與培養(yǎng)...............

12、.......................................……573.2.10豬2型鏈球菌基因組的提取....……，.................................................……573.2.H溫敏性重組質(zhì)粒的構(gòu)建.....................................................................……583.2.12重組質(zhì)粒的

13、鑒定................................................................................……583.2.13豬2型鏈球菌的電轉(zhuǎn)化.....................................................................……583.2.14豬鏈球菌￡琴沮基因缺失菌株s側(cè)一的篩選....................

14、..............……593.2.巧豬鏈球菌ssPA基因缺失突變株的Southem雜交驗(yàn)證...................……593.2.16豬鏈球菌551又咬基因缺失突變株的生物學(xué)特性研究......................……603.2.17回復(fù)菌株的構(gòu)建..............................................................................