擬南芥擴(kuò)張蛋白AtEXPA1基因的表達(dá)特性及其啟動(dòng)子順式作用元件的初步分析.pdf

1、本論文通過(guò)RT-PCR的方法，研究了擬南芥擴(kuò)張蛋白AtEXPA1基因的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)AtEXPA1基因在葉片中的表達(dá)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于根和花中，在不同脅迫處理下，AtEXPA1基因的應(yīng)答不同，其中，干旱，低溫(4℃)可以負(fù)調(diào)控基因表達(dá)。而水淹處理結(jié)果是隨時(shí)間表達(dá)量增加，到5小時(shí)為最高峰。同時(shí)發(fā)現(xiàn)隨著鹽和脫落酸處理的時(shí)間增加，AtEXPA1基因表達(dá)量下降。 在研究AtEXPA1基因表達(dá)特性的基礎(chǔ)上，克隆了AtEXPA1基因的啟動(dòng)子(翻譯起始

2、密碼子的上游897bp)。首先將啟動(dòng)子在不同位置缺失，得到不同長(zhǎng)度的片段，再連接報(bào)告基因GUS，構(gòu)建了一系列缺失表達(dá)載體質(zhì)粒。通過(guò)PEG介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化煙草原生質(zhì)體。結(jié)果表明翻譯起始密碼子上游287bp長(zhǎng)的啟動(dòng)子活性最強(qiáng)。轉(zhuǎn)化原生質(zhì)體后，不同條件和試劑處理原生質(zhì)體，再定量檢測(cè)GUS蛋白的活性，發(fā)現(xiàn)AtEXPA1基因的啟動(dòng)子上AAAG或CTTT與光調(diào)控有關(guān)，可能與Dof轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，在啟動(dòng)子上游-897到-626之間存在受冷負(fù)調(diào)控的元件，在-6