檸條錦雞兒NCED1基因啟動子及蛋白原核表達的初步分析.pdf

1、ABA作為一種重要的植物激素和生長調節(jié)劑，介導了高等植物在生命周期中對各種外界環(huán)境的響應和適應。9-順式環(huán)氧類胡蘿卜素雙加氧酶(9-cis-epoxycarotenoi d dioxygenase,NCED)催化的氧化裂解反應是高等植物 ABA生物合成的關鍵步驟之一,對 ABA的合成調控起著重要作用。研究檸條錦雞兒 NCED1基因的啟動子并對基因編碼蛋白進行初步分析，為研究基因的功能，從而為探索牧草抗逆基因的抗逆調控機制提供依據和參考。

2、
　　本研究利用染色體步移技術，克隆檸條錦雞兒 CkNCED1基因上游啟動子序列。經順式元件預測分析，該序列除基本的啟動元件之外，還含有2個脫落酸誘導響應元件 ABRE、此外還含有多個逆境相關的元件。將CkNCED1基因啟動子區(qū)分別連接到pGWB533和PBI121植物表達載體上,將構建的Promoter::GUS融合載體轉入野生型擬南芥中，GUS組織化學染色結果表明，CkNCED1基因在植物的葉、根、莖、花和角果的維管組織中均有

3、表達，且在葉片中表達強度最高。以上研究確定了檸條錦雞兒NCED1基因的表達部位和強度，進一步闡明該基因在植物 ABA相關抗逆脅迫反應中的作用。
　　為進一步研究基因的功能，本文對 CkNCED1蛋白的亞細胞定位和原核表達進行分析。通過構建 CkNCED1基因與綠色熒光蛋白基因融合的植物表達載體pCAMBIA1302-NC ED1-GFP,利用擬南芥原生質體轉化方法進行瞬時表達,研究檸條錦雞兒 NCED1基因編碼蛋白的亞細胞定位，結