檸條錦雞兒NCED1基因啟動(dòng)子及蛋白原核表達(dá)的初步分析.pdf

1、ABA作為一種重要的植物激素和生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，介導(dǎo)了高等植物在生命周期中對(duì)各種外界環(huán)境的響應(yīng)和適應(yīng)。9-順式環(huán)氧類胡蘿卜素雙加氧酶(9-cis-epoxycarotenoi d dioxygenase,NCED)催化的氧化裂解反應(yīng)是高等植物 ABA生物合成的關(guān)鍵步驟之一,對(duì) ABA的合成調(diào)控起著重要作用。研究檸條錦雞兒 NCED1基因的啟動(dòng)子并對(duì)基因編碼蛋白進(jìn)行初步分析，為研究基因的功能，從而為探索牧草抗逆基因的抗逆調(diào)控機(jī)制提供依據(jù)和參考。

2、
　　本研究利用染色體步移技術(shù)，克隆檸條錦雞兒 CkNCED1基因上游啟動(dòng)子序列。經(jīng)順式元件預(yù)測(cè)分析，該序列除基本的啟動(dòng)元件之外，還含有2個(gè)脫落酸誘導(dǎo)響應(yīng)元件 ABRE、此外還含有多個(gè)逆境相關(guān)的元件。將CkNCED1基因啟動(dòng)子區(qū)分別連接到pGWB533和PBI121植物表達(dá)載體上,將構(gòu)建的Promoter::GUS融合載體轉(zhuǎn)入野生型擬南芥中，GUS組織化學(xué)染色結(jié)果表明，CkNCED1基因在植物的葉、根、莖、花和角果的維管組織中均有

3、表達(dá)，且在葉片中表達(dá)強(qiáng)度最高。以上研究確定了檸條錦雞兒NCED1基因的表達(dá)部位和強(qiáng)度，進(jìn)一步闡明該基因在植物 ABA相關(guān)抗逆脅迫反應(yīng)中的作用。
　　為進(jìn)一步研究基因的功能，本文對(duì) CkNCED1蛋白的亞細(xì)胞定位和原核表達(dá)進(jìn)行分析。通過(guò)構(gòu)建 CkNCED1基因與綠色熒光蛋白基因融合的植物表達(dá)載體pCAMBIA1302-NC ED1-GFP,利用擬南芥原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化方法進(jìn)行瞬時(shí)表達(dá),研究檸條錦雞兒 NCED1基因編碼蛋白的亞細(xì)胞定位，結(jié)