外周血循環(huán)微顆粒檢測方法的建立及其臨床應用研究.pdf

1、目的：（1）建立流式細胞術（FCM）檢測外周靜脈血循環(huán)微顆粒（MPs）的實驗方法。（2）探討四種MPs在健康者及胃腺癌患者外周血中表達情況及其臨床意義。（3）研究胃腺癌患者手術治療過程中MPs變化趨勢，明確手術治療對外周血MPs表達水平的影響。探討急性胰腺炎（acute pancreatitis, AP）患者外周血內(nèi)皮細胞微顆粒（EMPs）的表達水平及治療前后變化。
　　方法：（1）FCM檢測MPs方法的建立：抽取空腹外周靜脈血，

2、以枸櫞酸鈉抗凝（1:9，含PGE1終濃度為300nM），4℃下3000rpm15min離心兩次，制備乏血小板血漿（PPP），用藻紅蛋白（PE）標記的四種特異性熒光抗體（CD61、CD142、CD62e、CD235a單抗），分別標記四種相應微顆粒：血小板微顆粒（PMPs）、組織因子陽性微顆粒（TF-MPs）、EMPs和紅細胞微顆粒（RMPs），以1.0 um的標準微球設定前向檢測區(qū)，大小在0~1.0 um之間、PE標記陽性的微粒為目的微顆

3、粒。（2）健康者及胃腺癌患者MPs表達檢測：選取30例健康志愿者及我院收治的85例確診為“胃腺癌”患者，制備PPP并檢測MPs表達。（3）手術對MPs水平的影響：所選取胃腺癌患者分別于術前、術后第1天、術后1周及術后1月抽取空腹外周靜脈血，檢測四種微顆粒并動態(tài)觀察其變化，為手術對MPs表達的影響提供一定依據(jù)。檢測AP患者EMPs表達水平及治療前后變化。
　　結果：（1）30例健康者 PMPs、TF-MPs、EMPs及 RMPs表達

4、水平分別為（92.1±65.5/ul）、（37.6±18.6/ul）、（197.2±80.3/ul）和（27.6±12.0/ul），PMPs與EMPs表達量占四種MPs總和的81％。（2）胃腺癌患者PMPs、TF-MPs、EMPs和RMPs表達水平分別為（169.9±81.4/ul）、（65.4±36.7/ul）、（178.06±119.42/ul）、（46.2±32.8/ul），其中PMPs、TF-MPs及RMPs表達水平與健康者對比

5、有統(tǒng)計學差異（P<0.05），EMPs表達在健康者與胃腺癌患者之間無統(tǒng)計學差異（P>0.05）。增高的PMPs、TF-MPs表達水平與胃腺癌TNM分期相關，III期及IV期較I、II期高（P<0.05），TF-MPs還與腫瘤脈管侵犯相關（P<0.05）。（3）胃腺癌患者術后第1天四種 MPs表達水平依次為（608.9±407.1/ul）、（135.2±151.8/ul）、（733.5±744.4/ul）、（78.0±73.6/ul），與

6、術前相比有統(tǒng)計學差異（P<0.01），術后MPs表達水平逐漸降低，至術后1月四種 MPs表達水平依次為（110.7±90.7/ul）、（42.2±29.5/ul）、（186.9±104.2/ul）、（25.8±13.4/ul），與術前水平相比差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），四種MPs水平與健康對照組相比無統(tǒng)計學差異（P>0.05）。急性胰腺炎患者EMPs表達水平為（584.0±317.5/ul），較健康者明顯增高（P<0.01），炎

7、癥治愈后EMPs水平恢復至正常（227.4±105.0/ul），與健康者相較無統(tǒng)計學差異（P>0.05）。
　　結論：（1）采用流式細胞術檢測外周血循環(huán)中微顆粒的方法具有科學可行性，標準化后的方法具有一定的科研和臨床應用價值。（2）胃腺癌患者外周血中PMPs、TF-MPs表達水平與胃腺癌TNM分期相關，Ⅲ期和Ⅳ期患者表達水平均高于Ⅰ期和Ⅱ期；胃腺癌患者TF-MPs高表達水平與腫瘤脈管系統(tǒng)侵犯有關。（3）手術創(chuàng)傷可顯著增加胃腺癌患者