南方鲇Dmrt1及其亞型cDNA的克隆和表達的研究.pdf

1、本研究采用RT-PCR與SMARTRACE相結(jié)合的方法從南方鲇(Silurusmeridionalis)克隆得到Dmrt1及其亞型全長cDNA。南方鲇Dmrt1(SoutherncatfishDmrt1，ScDmrt1)cDNA全長1347bp，包括一個編碼295個氨基酸的開放閱讀框、一個加尾信號(AATAAA)和一個poly(A)尾巴。ScDmrt1亞型cDNA全長1513bp，包括一個編碼271個氨基酸的開放閱讀框和一個poly(A

2、)尾巴。ScDmrt1及其亞型含有所有DM基因具有的典型特征——DM-domain。序列對比發(fā)現(xiàn)scDmrt1及其亞型與革胡子鲇Dmrt1最相似，它們同屬Dmrt1一類群，區(qū)別于Dmrt2-8。 在對scDmrt1及其亞型的序列分析中發(fā)現(xiàn)，它們只有3'末端有區(qū)別，而在5'端則完全相同。因此我們推測scDmrt1亞型是由于其前體mRNA在3'末端通過選擇性剪切產(chǎn)生的。同時，通過擴增scDmrt1基因第4、5個內(nèi)含子的片段和對其它脊

3、椎動物Dmrt1基因結(jié)構(gòu)的分析，我們推測scDmrt1基因可能含有6個外顯子，區(qū)別于其它脊椎動物的5個外顯子。測序結(jié)果表明擴增片段中包含了屬于第4和第5個外顯子部分和內(nèi)含子的供體位點(gt)和受體位點(ag)。因此我們推測scDmrt1的剪接模式不同于scDmrt1亞型，其產(chǎn)生是由于將scDmrt1前體mRNA剪切掉了第5個外顯子，并拼接上最后一個外顯子形成，而其亞型則由其前5個外顯子拼接而成。 另外，我們對scDmrt1及其亞

4、型在南方鲇各組織中的表達進行了研究。研究表明scDmrt1及其亞型在精巢和卵巢均有表達，表達量都是精巢高于卵巢。尤其是scDmrt1亞型在精巢的表達遠遠高于卵巢。ScDmrt1為雌雄性腺特異表達，而其亞型高表達于性腺，同時在雄魚微弱表達于腸和腎臟。 用雌激素E2、芳化酶抑制劑Fadrozole和雌激素受體拮抗劑Tamoxifen對孵化后(daysafterhatching，dah)5天的南方鲇仔魚進行浸浴處理20天。65dah時

5、的檢測表明在Fadrozole處理組和Tamoxifen處理組，scDmrt1及其亞型的表達上調(diào)，而E2組利對照組沒有scDmrt12及其亞型的表達。研究同時發(fā)現(xiàn)Fadrozole和Tamoxifen同時處理組scDmrt1及其亞型的表達沒有明顯上調(diào)。在對芳化酶表達的研究中，我們發(fā)現(xiàn)Fadrozole、Tamoxifen處理組和Fadrozole和Tamoxifen同時處理組卵巢型芳化酶的表達均被下調(diào)，而腦型芳化酶的表達沒有明顯變化。