烏鱧性別相關的Dmrt基因的克隆及其組織表達特征.pdf

1、近年來隨著養(yǎng)殖業(yè)的需要,烏鱧(Channa argu)逐漸成為國內(nèi)的特種養(yǎng)殖品種。為提高烏鱧子代雄性率及開展烏鱧的單性養(yǎng)殖,本研究采用RT-PCR和RACE的方法克隆出了烏鱧的Dmrt1基因和Dmrt4的部分基因,并對Dmrt1的表達特性進行了具體的分析,這將有助于了解烏鱧的性別決定機制。
　　Dmrt基因是涉及到性別決定和分化的保守基因家族,它廣泛存在于不同物種中。本研究通過使用簡并引物從烏鱧的基因組DNA中獲得了Dmrt1的保

2、守域DM1及Dmrt4的保守域DM4,對DM結構域進行測序,通過比對確定為Dmrt基因的保守域。根據(jù)獲得的保守域序列,設計3’RACE和5’RACE的引物,采用RACE的方法擴增Dmrt的全長cDNA。
　　在烏鱧的精巢組織克隆得到烏鱧Dmrt1基因的cDNA序列,并采用半定量和定量的手段對 Dmrt1 mRNA在烏鱧成魚中不同組織的表達差異進行分析。研究獲得的烏鱧Dmrt1基因cDNA全長為1573 bp,5’端非翻譯區(qū)25 b

3、p,編碼266個氨基酸的800 bp的開放閱讀框,747 bp含有脊椎動物典型的多腺苷酸化加尾信號AATAAA的3’端非翻譯區(qū)。通過對氨基酸序列的同源性進行分析表明,烏鱧Dmrt1基因與多種魚類相似度較高,與其他類動物相似度較低。氨基酸序列與銀鱈魚、黑棘鯛等魚類同源性較高,并與之共同聚為魚類的Dmrt1分支。RT-PCR和實時定量結果均表明Dmrt1在雌雄烏鱧的10個樣品中,在精巢中表達量最高,相對較弱地在卵巢中表達,在其余組織中Dmr

4、t1基因的表達量很少。以上實驗結果表明,Dmrt1基因可能跟性腺及生殖細胞的發(fā)育有關聯(lián)。
　　在烏鱧的卵巢組織中克隆出了烏鱧的Dmrt4基因的部分序列。Dmrt4基因通過5’端擴增,并分別得到192 bp的特異性條帶。經(jīng)過與保守域DM4進行拼接,已經(jīng)得到332bp的片段。對保守域DM4進行分析,可以看出雖然堿基序列有較大差異,但是編碼的氨基酸序列相似度非常高。我們可以看到,Dmrt4的進化是高度保守的,表明此基因在性別分化和功能的