西奧骨化醇抑制TGF-β1誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞SMMC-7721上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化.pdf

1、背景和目的:
　　肝癌是目前全球最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率在惡性腫瘤居中第五位，全世界每年新發(fā)現(xiàn)的肝癌患者達(dá)六十萬(wàn)例。其治療困難，病死率高，臨床上治療手段繁多，但手術(shù)仍然是綜合治療的主導(dǎo)方式。對(duì)于晚期肝癌的患者，手術(shù)失去意義，而導(dǎo)致這一結(jié)果重要原因是腫瘤對(duì)周圍組織的侵襲和腫瘤細(xì)胞的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。研究表明，上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）能促進(jìn)肝癌的侵襲和轉(zhuǎn)移，而抑制EMT

2、成為抑制腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的新途徑。
　　西奧骨化醇（seocalcitol,EB1089）是一種新研制的維生素D類似物，研究表明其不但能夠有效誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，還可顯著抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，具有對(duì)機(jī)體血鈣影響小的優(yōu)勢(shì)，若能通過實(shí)驗(yàn)證實(shí)EB1089通過抑制腫瘤細(xì)胞發(fā)生EMT來(lái)抑制其侵襲和遷移能力，將為西奧骨化醇應(yīng)用于臨床治療惡性腫瘤提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)及理論依據(jù)。本文通過研究EB1089對(duì)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1（transforming growth

3、 factor-β1 TGF-β1）誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞SMMC-7721上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響，為其抑制肝癌侵襲轉(zhuǎn)移提供新的證據(jù)，并進(jìn)一步探討其抗肝癌作用的可能機(jī)制。
　　方法：
　　常規(guī)培養(yǎng)SMMC-7721細(xì)胞，用1nmol/L EB1089、10nmol/L EB1089、100nmol/L EB1089、1000nmol/L EB1089作用于SMMC-7721細(xì)胞6、12、24、48h，篩選出具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的作用濃度和時(shí)間

4、。根據(jù)濃度、時(shí)間篩選結(jié)果將SMMC-7721細(xì)胞分為4個(gè)處理組（1000nmol/L EB1089組、10ng/mLTGF-β1組、10ng/mLTGF-β1+1000nmol/LEB1089組和空白對(duì)照組)，分別作用48h。用顯微鏡觀察四個(gè)處理組細(xì)胞形態(tài)改變情況；采用RT-PCR檢測(cè)處理組細(xì)胞上皮標(biāo)志性蛋白E-cadherin的mRNA表達(dá)量差異、間質(zhì)特征性蛋白N-cadherin、Vimentin的mRNA表達(dá)量差異；Western

5、 blot檢測(cè)處理組細(xì)胞E-cadherin、N-cadherin及Vimentin蛋白表達(dá)差異；遷移實(shí)驗(yàn)和侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)四個(gè)不同處理組SMMC-7721細(xì)胞侵襲能力和遷移能力。通過對(duì)處理組細(xì)胞形態(tài)變化和相關(guān)蛋白表達(dá)情況研究，明確EB1089對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞發(fā)生EMT的影響。遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步明確EB1089對(duì)肝癌細(xì)胞生物學(xué)特性的調(diào)節(jié)作用。
　　結(jié)果：
　　1.1000nmo/L EB1089作用48h時(shí)，SMMC

6、-7721細(xì)胞E-cadherin蛋白表達(dá)相對(duì)于對(duì)照組差異最為顯著（P＜0.05），為理想的作用濃度和時(shí)間。
　　2.TGF-β1作用后SMMC-7721細(xì)胞由原來(lái)的不規(guī)則多邊形變?yōu)殚L(zhǎng)梭行，并伸出較多觸角，EB1089能明顯抑制這種形態(tài)變化。實(shí)時(shí)RT-PCR及Western blot顯示：EB1089可有效抑制TGF-β1所致的E-cadherin mRNA和蛋白表達(dá)下降(P＜0.05)，同時(shí)降低N-cadherin、Viment