CCL20應(yīng)答Th17細胞在IgA腎病發(fā)病機制中的作用.pdf

1、研究背景:IgA腎病((ImmunoglobulinANephropathy,IgAN)通常在上呼吸道感染后發(fā)病或加重，但具體機制不明，溶血性鏈球菌（Hemolyticstreptococcus，HS）是其感染的主要病原菌之一，以甲型較常見。CD4+T細胞是參與腎小球腎炎發(fā)生發(fā)展過程中的重要免疫細胞。作為輔助性T細胞的新亞群，Th17細胞參與了包括哮喘、腎炎等疾病的自身免疫性損傷的發(fā)病機制及疾病的發(fā)生發(fā)展。研究發(fā)現(xiàn)，HS能夠誘導(dǎo)Th17

2、細胞的分化。而Th17細胞又通過循環(huán)而浸潤至腎實質(zhì)，分泌IL-17等細胞因子，這些細胞因子作用于系膜細胞、腎小管上皮細胞等腎臟固有細胞的表面受體，使其釋放大量的趨化因子CXCL1、CCL2、CCL20等，其中CCL20通過與相應(yīng)的受體CCR6相結(jié)合，招募體內(nèi)中性粒細胞等最終觸發(fā)免疫介導(dǎo)的腎臟病理損傷過程。基于上述，本研究推測:上呼吸道感染誘發(fā)或加重IgAN過程中，HS有可能通過CCL20應(yīng)答Th17細胞效應(yīng)致腎小球炎癥損傷，因此，深入探

3、討CCL20應(yīng)答Th17細胞在IgA腎病發(fā)病機制中的作用有十分重要的臨床意義。
　　目的:本研究擬明確HS導(dǎo)致IgAN免疫炎癥損傷加重過程中CCL20對Th17細胞應(yīng)答效應(yīng)。具體如下:
　　方法:
　　(1)建立甲型HS感染IgAN小鼠模型并采用抗CCL20抗體對其進行干預(yù):
　　采用脂多糖、四氯化碳、牛血清白蛋白聯(lián)合建立IgANBALB/c小鼠模型，在此基礎(chǔ)上，采用從IgAN扁桃體炎患者腭扁桃體中分離的甲型HS

4、感染IgAN小鼠建立HS感染IgAN模型。用CCL20抗體對IgAN小鼠模型進行干預(yù);實驗隨機分為正常對照組、IgAN組、HS感染IgAN組、抗CCL20抗體干預(yù)IgAN組、抗CCL20抗體干預(yù)HS感染IgAN組。
　　(2)標(biāo)本收集及指標(biāo)檢測
　　干預(yù)完成后獲取小鼠尿液及肺、腎組織，對小鼠尿液行尿蛋白檢測及尿沉渣鏡檢;采用HE染色和PAS染色觀察小鼠腎組織形態(tài)學(xué)變化，HE染色觀察肺組織炎癥細胞浸潤情況，電鏡下觀察腎組織超微

5、結(jié)構(gòu)的改變，免疫熒光觀察腎組織IgA情況;分離各組小鼠一側(cè)腎組織中的淋巴細胞，流式細胞計數(shù)法測定Th17細胞和Treg細胞數(shù)目和比率;ELISA檢測腎組織勻漿液中CCL20、IL-17A、IL-6及IL-21的表達。
　　結(jié)果:
　　(1)小鼠血尿蛋白尿變化
　　對照組小鼠尿液檢查示血尿、蛋白尿均為陰性;IgAN小鼠均出現(xiàn)血尿、蛋白尿(P＜0.05);HS感染IgAN小鼠蛋白尿程度較IgAN組加重(P＜0.05）;抗C

6、CL20抗體干預(yù)后IgAN小鼠及HS感染IgAN小鼠蛋白尿程度明顯減輕(P＜0.05）。
　　(2)抗CCL20抗體對小鼠腎、肺組織形態(tài)學(xué)的影響形態(tài)學(xué)檢測結(jié)果提示IgAN小鼠模型和HS感染IgAN小鼠模型構(gòu)建成功:與對照組小鼠相比，HE染色和PAS染色顯示IgAN小鼠出現(xiàn)系膜細胞及系膜基質(zhì)增生，而HS感染IgAN的上述病變進一步加重，系膜細胞及系膜基質(zhì)增生更明顯。與對照組小鼠相比，電鏡下IgAN小鼠腎組織可見系膜細胞、系膜基質(zhì)輕度

7、增生，有電子致密物沉積，足突階段性融合;HS感染IgAN小鼠病變較IgAN小鼠進一步加重:系膜細胞、系膜基質(zhì)輕中度增生，可見大量電子致密物沉積，足突廣泛融合，少數(shù)毛細血管內(nèi)皮細胞肥大增生。免疫熒光顯示，與IgAN小鼠相比，HS感染IgAN小鼠腎組織中沉積于毛細血管壁及系膜區(qū)的IgA強度增強。而抗CCL20抗體干預(yù)則能夠改善IgAN小鼠及HS感染IgA腎病小鼠腎臟組織病變。
　　與對照組小鼠相比，HE染色提示HS感染能夠加據(jù)IgAN

8、小鼠的氣道炎癥和腎臟病變;而抗CCL20抗體干預(yù)則能夠減輕IgAN小鼠及HS感染IgAN小鼠氣道炎癥及腎組織病變。
　　(3)抗CCL20抗體對小鼠Th17細胞的影響
　　流式細胞檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對照組小鼠相比，IgAN小鼠腎臟Treg水平降低(P＜0.05），而Th17升高(P＜0.05），Th17/Treg比值升高(P＜0.05);HS感染使Treg水平進一步降低，Th17和Th17/Treg比值進一步升高(P＜0.05

9、);抗CCL20抗體干預(yù)能夠使IgAN小鼠及HS感染IgAN小鼠Th17水平下降(P＜0.05)，Treg無明顯變化，但Th17/Treg比值降低(P＜0.05)，免疫失衡有所改善（P＜0.05）。
　　ELISA檢測結(jié)果顯示，與對照組相比，IgAN小鼠腎組織勻漿液中CCL20、IL-17A、IL-6及IL-21明顯升高(P＜0.05)，與IgAN小鼠相比，HS感染IgAN小鼠后上述細胞因子顯著升高(P＜0.05)，而抗CCL20