Nicaraven對LPS誘導(dǎo)小鼠膿毒性休克的保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、研究目的：膿毒癥（ Sepsis）是由細(xì)菌感染引起的全身炎癥反應(yīng)綜合征（Systemic Inflammatory Response Syndrome, SIRS），它包括嚴(yán)重膿毒癥和膿毒性休克。膿毒性休克仍然是目前重癥監(jiān)護(hù)病房病人死亡的主要原因，而臨床上尚缺乏有效的治療藥物，因此，開發(fā)效果明顯、副作用低的新型抗休克藥物十分必要。尼卡拉溫（Nicaraven，AVS）是一種人工合成的新型羥自由基清除劑，對多種器官具有明顯的保護(hù)作用。本課

2、題通過整體和離體研究，旨在探討AVS對膿毒性休克模型的保護(hù)作用及其機(jī)制。
　　實驗方法：1.AVS對小鼠膿毒血癥模型的治療作用評價：研究采用小鼠盲腸結(jié)扎穿刺（CLP）和內(nèi)毒素（LPS）誘導(dǎo)的膿毒血癥模型評價AVS的抗膿毒性休克作用：腹腔給予AVS（100 mg/kg），分別觀察3天和7天小鼠的存活率；造模3天后取小鼠肝、肺、脾、腎等臟器進(jìn)行病理學(xué)檢查。2.AVS與地塞米松聯(lián)合用藥對LPS誘導(dǎo)小鼠膿毒性休克的治療效果評價：采用AVS

3、與無效劑量的地塞米松聯(lián)合用藥，觀察對 LPS誘導(dǎo)的膿毒性休克小鼠存活率的影響；同時提取不同組織臟器的蛋白，采用ELISA方法檢測各組織TNF-α、IL-1β和IL-6炎癥因子釋放水平。3.體外研究分析 AVS抗膿毒性休克作用的可能機(jī)制：取健康小鼠胸腺和脾臟組織，觀察給予AVS對小鼠免疫系統(tǒng)的影響。體外培養(yǎng)RAW264.7巨噬細(xì)胞，建立LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)模型，并檢測AVS對一氧化氮（NO）和活性氧（ROS）釋放的影響；采用熒光定

4、量PCR和ELISA方法檢測相關(guān)炎癥因子的基因表達(dá)和釋放水平；采用Western Blot方法觀察AVS對Sirt1/NF-κB、AMPK信號通路及一氧化氮合酶表達(dá)的影響。
　　實驗結(jié)果：1.AVS單獨應(yīng)用具有一定的抗膿毒性休克作用：結(jié)果顯示，單獨應(yīng)用AVS對LPS誘導(dǎo)的膿毒性休克小鼠的存活率具有一定的改善作用，組織病理檢查顯示AVS能減輕重要臟器的損傷,抑制TNF-α、IL-1β和IL-6等炎癥因子對各種器官的浸潤。2.AVS與

5、地塞米松聯(lián)合用藥能明顯提高膿毒癥小鼠的存活率：AVS與無效劑量的地塞米松聯(lián)合用藥可明顯提高膿毒癥小鼠的存活率，雖然聯(lián)合用藥對各器官的炎性因子浸潤具有明顯的抑制作用，但與AVS單獨應(yīng)用相比無明顯改善。3.AVS的抗膿毒癥的機(jī)制可能與其抑制炎癥作用有關(guān)：和地塞米松相比，AVS無明顯的免疫抑制作用。在LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)模型中，AVS可顯著抑制RAW264.7細(xì)胞NO和ROS的產(chǎn)生，抑制多種炎性基因的表達(dá)，有效減少TNF-α、IL-1