Apelin防治小鼠低氧性肺動脈高壓的作用與調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝有關(guān).pdf

1、本文主要從以下幾方面進行了論述：
　　第一部分 低氧性肺動脈高壓小鼠體內(nèi)脂質(zhì)水平的變化
　　目的：
　　觀察低氧性肺動脈高壓小鼠體內(nèi)脂質(zhì)水平的變化。
　　方法：
　　1.動物模型的建立:SPF級成年雄性C57BL/6小鼠20只，隨機平均分為2組:常氧組(normoxia)和低氧組(hypoxia)。Hypoxia組小鼠置于常壓飼養(yǎng)動物飼養(yǎng)艙內(nèi)，艙內(nèi)充入氮氣使氧濃度維持在9％～11％，二氧化碳濃度＜3％，每天

2、23h，1h用于清潔艙內(nèi)衛(wèi)生，day/night周期為12h/12h，連續(xù)3周，普通常規(guī)飼料飼養(yǎng)。Normoxia組小鼠置于常壓飼養(yǎng)動物艙內(nèi)，艙內(nèi)充入循環(huán)空氣，其他飼養(yǎng)條件與hypoxia組相同。
　　2.血流動力學、右心室肥大指數(shù)測定:右心導管法測量小鼠右心室收縮壓(RVSP);稱取右心室(RV)、左心室與室間隔(LV+S)的重量，計算右心室肥大指數(shù)RV/(LV+S)。
　　3.肺小血管重塑檢測:Masson染色觀察小鼠肺

3、小血管的重塑情況。
　　4.小鼠血漿中脂質(zhì)含量的檢測:采用ELISA法檢測小鼠血漿中總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HLD-C)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)的含量;并計算HDL/LDL比值。
　　5.脂質(zhì)代謝相關(guān)基因的檢測:實時定量PCR(real-time PCR)法檢測小鼠肝組織中HMG-CoA還原酶(HMGCR)、固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合因子（SREBF2）、低密度脂蛋白受體(LDLR)、三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體A1

4、(ABCA1)、清道夫受體B1(SR-B1)基因的表達。
　　6.右心室收縮壓與脂質(zhì)代謝相關(guān)基因的相關(guān)性分析:用SPSS20.0軟件分析normoxia組和hypoxia組小鼠RVSP與HMGCR、SREBF2、LDLR、ABCA1、SR-B1各基因的相關(guān)性。
　　結(jié)果：
　　1.Hypoxia組小鼠RVSP、RV/(LV+S)較normoxia組分別高69％、50％(均P＜0.05)。
　　2.小鼠肺組織Mas

5、son染色顯示:與normoxia組比較，hypoxia組小鼠肺小動脈血管壁明顯增厚，肺內(nèi)細小血管重塑明顯。
　　3.Hypoxia組小鼠血漿中TC、LDL-C的含量與normoxia組無顯著差異(均P＞0.05); hypoxia組小鼠血漿中HDL-C的含量較normoxia組低17％(P＜0.05)，HDL/LDL比值也較normoxia組低38％（P＜0.05）。
　　4.野生型小鼠RVSP與HDL/LDL比值呈中度負

6、相關(guān)。
　　5.Hypoxia組小鼠肝組織中HMGCR、SREBF2基因表達與normoxia組無明顯差異(P＞0.05); hypoxia組小鼠肝組織中ABCA1、LDLR、SR-B1基因表達較normoxia組分別低41％、41％、53％（均P＜0.05）。
　　6.Normoxia組與hypoxia組小鼠RVSP與ABCA1、LDLR、SR-B1基因表達顯著負相關(guān)（均P＜0.05）;RVSP與HMGCR、SREBF2基

7、因表達無明顯相關(guān)性（均P＞0.05）。
　　結(jié)論：
　　低氧性肺動脈高壓小鼠體內(nèi)脂質(zhì)水平發(fā)生變化，提示脂質(zhì)代謝異?？赡軈⑴c小鼠低氧性肺動脈高壓的形成。
　　第二部分 apelin防治小鼠低氧性肺動脈高壓的作用與調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝有關(guān)
　　目的：
　　探討apelin防治低氧性肺動脈高壓的作用是否與調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝有關(guān)
　　方法：
　　1.建立低氧性肺動脈高壓動物模型:所有小鼠以C57BL/6背景，30只S

8、PF級成年雄性apoE基因敲除(apoE-/-)小鼠隨機平均分為3組，即:常氧組(normoxia)、低氧組(hypoxia)和低氧加apelin組(hypoxia+apelin)。Hypoxia組和hypoxia+apelin組小鼠置于常壓飼養(yǎng)動物飼養(yǎng)艙內(nèi)，艙內(nèi)充入氮氣使氧濃度維持在9％～11％，CO2濃度＜3％，每天23h，1h用于清潔艙內(nèi)衛(wèi)生，day/night周期為12h/12h，連續(xù)3周，普通常規(guī)飼料飼養(yǎng)。Hypoxia+ap

9、elin組小鼠每天低氧前腹腔注射[Pyr1]-apelin-13(20nmol/kg·d)，hypoxia組腹腔注射相同體積的生理鹽水。Normoxia組小鼠置于常壓飼養(yǎng)動物艙內(nèi)，艙內(nèi)充入循環(huán)空氣，其他飼養(yǎng)條件與hypoxia組相同。
　　2.血流動力學、右心肥大指數(shù)測定:右心導管法測量小鼠RVSP;稱取LV+S和RV的重量，計算右心肥大指數(shù)RV/(LV+S)。
　　3.肺小血管重塑檢測:Masson染色觀察各組小鼠肺小血管

10、的重塑情況。
　　4.小鼠血漿中脂質(zhì)代謝指標檢測:采用ELISA法檢測小鼠血漿中TC、HLD-C、LDL-C的含量;并計算HDL/LDL比值。
　　5.小鼠脂質(zhì)代謝相關(guān)基因的檢測:real-time PCR法檢測小鼠肝組織中ABCA1、LDLR、SR-B1、HMGCR、SREBF2基因的表達。
　　6.小鼠脂質(zhì)代謝相關(guān)蛋白的檢測:Western blot法檢測小鼠肺組織中過氧化物酶體增殖物激活受體γ（peroxisom

11、e proliferators-activated receptor gamma，PPARγ）蛋白的表達。
　　結(jié)果：
　　1.Hypoxia組小鼠RVSP、RV/(LV+S)較normoxia組分別高53％、84％（均P＜0.05）;hypoxia+apelin組小鼠RVSP、RV/(LV+S)較hypoxia組分別低38％、32％（均P＜0.05）。
　　2.小鼠肺組織Masson染色顯示:與normoxia組比較

12、，hypoxia組小鼠肺小動脈血管壁明顯增厚，肺內(nèi)細小血管重塑明顯;與hypoxia組相比較，hypoxia+apelin組小鼠肺內(nèi)細小血管重塑明顯改善。
　　3.Hypoxia組小鼠血漿中TC、LDL-C、HDL-C含量及HDL/LDL比值與normoxia組相比均無顯著差異（均P＞0.05）。Hypoxia+apelin組小鼠血漿中TC、LDL-C含量與hypoxia組相比也無顯著差異（均P＞0.05）;hypoxia+ape

13、lin組小鼠血漿中HDL-C含量較hypoxia組高21％(P＜0.05)，HDL/LDL比值較hypoxia組高20％(P＜0.05)。
　　4.Hypoxia組小鼠肝組織中ABCA1、HMGCR、LDLR、SREBF2基因表達較normoxia組分別高29％、68％、82％、58％（均P＜0.05），SR-B1基因表達與normoxia組無顯著差異(P＞0.05)。Hypoxia+apelin組小鼠肝組織中ABCA1、LDLR

14、、SR-B1、SREBF2基因表達較hypoxia組高69％、241％、112％(均P＜0.05)，HMGCR基因表達較hypoxia組低45％(P＜0.05)。
　　5.Hypoxia組小鼠肺組織中PPARγ蛋白表達較normoxia組高104％(P＜0.05); hypoxia+apelin組小鼠肺組織中PPARγ蛋白表達較hypoxia組高47％。
　　結(jié)論：
　　Apelin防治低氧性肺動脈高壓、減輕肺血管重塑