IL-22對(duì)大鼠小體積移植肝保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的：建立大鼠全肝移植模型、50％減體積肝移植模型和30%小體積肝移植模型，探究IL-22在不同體積肝移植模型中的表達(dá)；建立30%小體積肝移植模型，探究IL-22對(duì)小體積移植肝的保護(hù)作用。
　　方法：⑴選擇雄性SD大鼠，建立大鼠全肝移植模型（n=30），50%減體積肝移植模型（n=30）和30%小體積肝移植模型（n=30），記錄術(shù)中供、受體手術(shù)時(shí)間，冷缺血時(shí)間、無(wú)肝期及下腔靜脈阻斷時(shí)間，觀察大鼠7天內(nèi)生存情況。⑵建立全肝移植模型全

2、肝移植組（n=48），50%肝移植模型50%肝移植組（n=48）和30%肝移植模型30%肝移植組（n=48），每組分別在術(shù)后6小時(shí)、1天、3天和7天處死6只大鼠，檢測(cè)血清ALT、AST水平，計(jì)算肝臟再生率，對(duì)肝臟組織進(jìn)行HE染色及免疫組化PCNA染色，使用 RT-PCR檢測(cè)IL-22mRNA；使用Western blot法檢測(cè)IL-22與STAT3。⑶建立大鼠30%小體積肝移植模型，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組（n=56），術(shù)中注射大鼠重組 IL-2

3、2；對(duì)照組（n=56），術(shù)中注射生理鹽水。術(shù)中記錄供、受體手術(shù)時(shí)間，冷缺血時(shí)間，無(wú)肝期和下腔靜脈阻斷時(shí)間，在術(shù)后6小時(shí)，1天，3天和7天四個(gè)時(shí)間點(diǎn)，每組處死5只大鼠，檢測(cè)血清ALT、AST，計(jì)算肝臟再生率，對(duì)肝組織進(jìn)行HE染色及免疫組化PCNA染色，兩組隨機(jī)選取8只術(shù)后大鼠用于生存率比較，觀察周期為7天。
　　結(jié)果：①三組術(shù)中記錄的各項(xiàng)指標(biāo)未見(jiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，全肝移植組、50%肝移植組和30%肝移植組7天生存率分別為93.3%（14/

4、15），86.7%（13/15）和46.7%（7/15）。②在術(shù)后6小時(shí)、1天兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)30%肝移植組血清ALT、AST水平顯著高于50%肝移植組（P<0.05）；HE染色提示30%肝移植組肝臟組織結(jié)構(gòu)損傷大于另外兩組；肝再生率分析顯示30%肝移植組在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)均低于50%肝移植組（P<0.01）；50%肝移植組 PCNA陽(yáng)性細(xì)胞率提示術(shù)后1天肝細(xì)胞再生迅速，而30%肝移植組術(shù)后3天開(kāi)始升高；在50%肝移植組IL-22 mRNA在術(shù)后1

5、天大量增加，高于另外兩組（P<0.01），在30%肝移植組，術(shù)后第3天IL-22 mRNA表達(dá)繼續(xù)增多，并且高于另外兩組（P<0.01），術(shù)后第7天仍保持較高水平且高于另外兩組（P<0.01）。Western blot檢測(cè)顯示，50%肝移植組的IL-22在術(shù)后6小時(shí)、1天時(shí)表達(dá)逐漸增高，30%肝移植組術(shù)后1天開(kāi)始增高，至術(shù)后7天，仍有較高的表達(dá)；STAT3在術(shù)后7天內(nèi)的表達(dá)與對(duì)照組相比較基本無(wú)變化；p-STAT3在50%肝移植組術(shù)后6小

6、時(shí)開(kāi)始有較高表達(dá)，在30%肝移植組，術(shù)后6小時(shí)可見(jiàn)表達(dá)，隨后表達(dá)增多，在術(shù)后第7天，仍可見(jiàn)較高程度的表達(dá)。③術(shù)中記錄相關(guān)信息未見(jiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；術(shù)后1天實(shí)驗(yàn)組血清ALT、AST水平低于對(duì)照組（P<0.05）；HE染色提示實(shí)驗(yàn)組在術(shù)后1天肝臟組織結(jié)構(gòu)開(kāi)始恢復(fù)；實(shí)驗(yàn)組的肝臟再生率均高于對(duì)照組；PCNA提示，實(shí)驗(yàn)組肝細(xì)胞再生較早，術(shù)后1天陽(yáng)性細(xì)胞率顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。實(shí)驗(yàn)組大鼠7天生存率為62.5%（5/8），對(duì)照組大鼠7天生存率為3

7、7.5%（3/8）。
　　結(jié)論：⑴大鼠肝移植以及部分肝移植模型是一個(gè)難度較高的模型，通過(guò)熟練顯微手術(shù)操作，注重手術(shù)細(xì)節(jié)，可以獲得較理想的手術(shù)成功率與生存率，本研究中，各組之間術(shù)中供體手術(shù)時(shí)間、移植肝冷缺血時(shí)間、受體無(wú)肝期、受體肝下下腔靜脈阻斷時(shí)間以及受體手術(shù)時(shí)間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，模型趨于穩(wěn)定，可以用于進(jìn)一步的研究。⑵50%大鼠部分肝移植模型組 IL-22的表達(dá)要早于30%肝移植組；同時(shí)肝細(xì)胞的損傷程度與肝細(xì)胞再生的變化趨勢(shì)與IL-22