RUNX3對BMP9誘導的間充質(zhì)干細胞成骨分化的影響.pdf

1、目的：研究和確認RUNX3對BMP9誘導的間充質(zhì)干細胞成骨分化的影響。
　　方法：BMP9腺病毒感染間充質(zhì)干細胞，通過實時熒光定量PCR(RT-qPCR)檢測內(nèi)源性Runx3的基因水平，通過Western Blot檢測內(nèi)源性RUNX3蛋白的表達。構(gòu)建過表達RUNX3(Ad-RUNX3)和干擾RUNX3（Ad-siRUNX3）的腺病毒，通過RT-PCR進行驗證。利用過表達RUNX3(Ad-RUNX3)和干擾RUNX3腺病毒(Ad-s

2、iRUNX3)處理間充質(zhì)干細胞，通過堿性磷酸（ALP）染色和活性定量測定，檢測成骨早期指標ALP；用茜素紅S染色，檢測成骨晚期指標鈣鹽沉積。同時用流式細胞儀檢測RUNX3對BMP9誘導的間充質(zhì)干細胞增殖和周期的影響。利用RT-qPCR檢測成骨相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子Id1、Id2、Dlx5和Runx2的基因表達；利用Western Blot檢測DLX5和RUNX2的蛋白表達；通過Western Blot檢測RUNX3對經(jīng)典的BMPs/Smad信號通

3、路中Smad1/5/8和非經(jīng)典的MAPK信號通路中p38和ERK1/2的變化。
　　結(jié)果：BMP9可以使MSCs中RUNX3基因和蛋白表達升高（p<0.05）；過表達和干擾RUNX3都可以增強BMP9誘導的早期成骨指標ALP活性，增加S期細胞的比例以及上調(diào)成骨相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子Id1和Id2的基因表達（p<0.05）；過表達RUNX3可以增強BMP9誘導的晚期成骨指標鈣鹽沉積，而干擾RUNX3可以抑制BMP9誘導的晚期成骨指標鈣鹽沉積。

4、過表達RUNX3促進BMP9誘導的成骨相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子DLX5和RUNX2的基因和蛋白表達，干擾RUNX3抑制DLX5和RUNX2的基因和蛋白表達（p<0.05）。過表達RUNX3促進BMP9誘導的Smad1/5/8的磷酸化，干擾RUNX3抑制BMP9誘導的Smad1/5/8的磷酸化，對總的Smad1/5/8蛋白水平無影響。RUNX3不影響B(tài)MP9誘導的p38、ERK1/2的磷酸化水平。
　　結(jié)論：RUNX3在調(diào)控BMP9誘導間充質(zhì)干