脂多糖激活TLR4信號(hào)通路對(duì)BMP9誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的影響研究.pdf

1、目的：
　　分析脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）激活Toll樣受體4（Toll-like receptor4，TLR4）信號(hào)通路對(duì)BMP9誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cells，MSCs）成骨分化的影響，并探討其可能的影響機(jī)制。
　　方法：
　　首先通過(guò)RT-PCR和Western blot檢測(cè)MSCs中TLR4的內(nèi)源性表達(dá)；再用Ad-GFP和Ad-BMP9感染MSCs后通

2、過(guò)Western blot檢測(cè)TLR4表達(dá)變化，通過(guò)RT-PCR檢測(cè)TLR4下游靶基因IL-1β和IL-6表達(dá)變化；之后在Ad-GFP和Ad-BMP9感染的MSCs中加入LPS，分別檢測(cè)堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）、鈣鹽沉積、晚期成骨標(biāo)志基因骨橋蛋白（osteopontin，OPN）的表達(dá)變化、Smad1/5/8信號(hào)通路激活情況和成骨關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子 runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子2（runt-related tra

3、nscription factor2，Runx2）的表達(dá)變化；隨后在N-乙酰半胱氨酸（N-acetyl-L-cysteine，NAC）預(yù)處理MSCs后，加入LPS，通過(guò)DCFH-DA法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧（reactive oxygen species，ROS）變化，通過(guò)Western blot檢測(cè)抗氧化相關(guān)因子 Nrf2、SOD1和SOD2的表達(dá)變化；然后在BAY11-7082預(yù)處理 MSCs后加入LPS，用DCFH-DA法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)RO

4、S變化；最后用BAY11-7082和NAC預(yù)處理Ad-GFP和Ad-BMP9感染的MSCs，再加入LPS，分別檢測(cè)ALP、鈣鹽沉積、OPN的表達(dá)變化、Smad1/5/8信號(hào)通路激活情況和Runx2的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：
　　TLR4在3種MSCs中均有表達(dá)；外源性過(guò)表達(dá)BMP9可以抑制TLR4的表達(dá)，但不影響IL-1β和IL-6表達(dá)；LPS激活TLR4信號(hào)通路抑制BMP9誘導(dǎo)的ALP活性、鈣鹽沉積、OPN表達(dá)、Smad1/

5、5/8信號(hào)通路的激活和Runx2的表達(dá)；LPS激活TLR4信號(hào)通路增加MSCs中ROS；BAY11-7082可以阻斷LPS激活TLR4信號(hào)通路導(dǎo)致的MSCs中ROS增加；BAY11-7082和NAC均可以部分逆轉(zhuǎn)LPS激活TLR4信號(hào)通路后對(duì)BMP9誘導(dǎo)的ALP活性、鈣鹽沉積、OPN表達(dá)、Smad1/5/8信號(hào)通路的激活和Runx2的表達(dá)的抑制。
　　結(jié)論：
　　LPS激活TLR4可以通過(guò)NF-κB/ROS抑制BMP9誘導(dǎo)M