細胞色素C的變化在重癥急性胰腺炎PMN線粒體凋亡途徑異常中的意義及中西醫(yī)結合治療.pdf

1、背景和目的：重癥急性胰腺炎(severe acute pancreatitis，SAP)發(fā)病急、病情進展快，在發(fā)病早期可伴全身炎癥反應綜合征(systemic inflammatory response syndrome，SIRS)，進而發(fā)展至多器官功能障礙綜合征(multiple organ dysfunction syndrome，MODS)，致使其病死率居高不下。SIRS是SAP發(fā)展至MODS的前期表現(xiàn)，也是SAP惡化的常見病因。

2、
　　 中性粒細胞(polymorphonuclear neutrophils，PMN)是人體免疫防御系統(tǒng)的第一道防線，在炎癥的發(fā)展過程中起關鍵作用。PMN在血液循環(huán)中的生命周期很短，達到生命周期的PMN以凋亡的方式被巨噬細胞識別、吞噬而清除。然而PMN的凋亡障礙會導致炎癥反應持續(xù)發(fā)展和加劇，大量凋亡延遲的PMN聚集于炎癥部位并釋放細胞因子、炎性介質和細胞毒性內(nèi)容物，從而造成組織損傷，導致SIRS并加重SAP。細胞色素C是第一種

3、被發(fā)現(xiàn)的由線粒體內(nèi)膜釋放的促凋亡蛋白，在細胞凋亡中起重要作用。在凋亡信號的刺激下，細胞色素C從線粒體釋放至胞質，進而誘導細胞凋亡。通過研究外周血PMN線粒體內(nèi)膜蛋白細胞色素C在細胞凋亡中的表達變化，可揭示細胞色素C與PMN凋亡延遲的部分具體機制。本實驗旨在研究在SAP所致的SIRS大鼠模型中，PMN細胞色素C的表達變化，并進一步討論中藥大承氣湯和西藥地塞米松對SAP的治療作用和部分機制。
　　 方法：經(jīng)膽胰管逆行注入1.5％去氧

4、膽酸鈉溶液制備大鼠SAP的模型[5.6]。將75只Sprague-Dawley(SD)大鼠隨機分為假手術(SO)組、重癥急性胰腺炎SIRS(SIRS)組、地塞米松(DEX)組、大承氣湯(DCQT)組以及地塞米松和大承氣湯聯(lián)合用藥(ZXY)組。SO組和SIRS組以生理鹽水灌胃（劑量1ml/100g）；DEX組以地塞米松經(jīng)腹腔內(nèi)注射給藥(劑量1mg/100g);DCQT組以大承氣湯灌胃(劑量1mg/100g)，ZXY組聯(lián)合用藥。各治療組于造

5、模后2小時和12小時分別給藥一次。24h后采集外周血分離血清和PMN，并取胰腺標本做病理。
　　 光鏡下觀察各組胰腺標本病理改變，進行組織病理學評分；測定血清淀粉酶含量并用酶聯(lián)免疫吸附測定技術（ELISA法）檢測血清IL-6的表達水平；應用Western-Blot技術定量檢測各實驗組蛋白細胞色素C的表達變化。
　　 結果：
　　 1．各實驗組光鏡下胰腺標本病理改變：與SO組比較，SIRS組具有顯著性病理改變（水腫

6、：1.90±0.06vs0.70±0.12、炎癥：1.80±0.11vs0.05±0.03、出血：1.95±0.06vs0、壞死：2.85±0.09vs0、空泡形成：2.20±0.10vs0，P＜0.01）；與SIRS組比較，各治療組均有不同程度的病理改善，且具有明顯差異(P＜0.05)，其中ZXY組與SIRS組比較具有顯著性差異（水腫：1.30±0.06vs1.90±0.06、炎癥：1.20±0.01vs1.80±0.11、出血：0.

7、80±0.04vs1.95±0.06、壞死：2.00±0.05vs2.85±0.09、空泡形成：1.30±0.08vs2.20±0.10，P＜0.01)。
　　 2．各實驗組血清淀粉酶含量和炎性介質IL-6水平的測定:
　　 (1)與SO組比較，SIRS組淀粉酶和IL-6水平明顯升高，有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)：
　　 (2)與SIRS組比較，各治療組淀粉酶和IL-6水平明顯下調(diào)，有顯著性差異(P＜0.01)：

8、
　　 (3)各治療組間比較：與DEX組和DCQT比較，ZXY組淀粉酶和IL-6水平下調(diào)，有統(tǒng)計學意義(P＜0.01):DEX組與DCQT組比較，淀粉酶和IL-6水平變化不明顯，無統(tǒng)計學意義。
　　 3．各實驗組大鼠PMN線粒體蛋白細胞色素C表達水平的比較：
　　 (1)與SO組比較，SIRS組細胞色素C表達水平明顯減少，且具有顯著性差異（0.41±0.01vs2.28±0.30，P＜0.01）；
　　

9、(2)與SIRS組比較，DEX組和DCQT組均具有不同程度的細胞色素C表達水平上調(diào)，且具有差異性(P＜0.05)。其中ZXY組與SIRS組比較，具有顯著性差異（2.20±0.27vs0.41±0.01，P＜0.01）；
　　 (3)各治療組間比較：與DEX組和DCQT組比較，ZXY組細胞色素C表達水平明顯上調(diào)(P＜0.05);DEX組與DCQT組比較，細胞色素C表達變化不明顯，無統(tǒng)計學意義。
　　 結論：較SO組，SIR

10、S組胰腺病理改變程度最嚴重，而各治療組均有不同程度的改善，但ZXY組病理改善效果最佳，這表明單一用藥對大鼠胰腺病理改變不如中西藥聯(lián)合應用顯著。建立SAP的大鼠模型后，各模型組淀粉酶含量和IL-6明顯升高并且各治療組有相應改善，其中ZXY組改善較為明顯。在SIRS組，細胞色素C的表達水平顯著下降，與之相比各治療組均有不同程度的上調(diào)，而中西醫(yī)結合治療對細胞色素C表達水平的提高優(yōu)于單一用藥組，提示當SAP時細胞色素C表達水平下降，可能是導致P