tPNS對(duì)hBMSCs誘導(dǎo)分化后神經(jīng)元樣細(xì)胞生長狀態(tài)及凋亡的影響.pdf

1、目的：研究三七總皂苷(tPNS)與堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)在人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(hBMSCs)分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞過程中的誘導(dǎo)、抗凋亡作用及作用劑量。
　　 方法：hBMSCs 取自健康成年志愿者，全骨髓貼壁法分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增、純化hBMSCs，流式細(xì)胞儀檢測(cè)hBMSCs表面的CD29、CD44、CD105、CD34分子，并測(cè)定細(xì)胞周期。取第3代hBMSCs，含20％胎牛血清的1mmol/L β-巰基乙醇(β-ME)預(yù)誘

2、導(dǎo)24h，繼而用20ng/mLbFGF（標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照組）、1.0mg/mL tPNS（藥物組）、20ng/mL bFGF+(0.5 mg/mL、1.0mg/mL、2.0mg/mL) tPNS（低、中、高劑量聯(lián)合組）誘導(dǎo)液誘導(dǎo)，設(shè)立空白對(duì)照組。采用免疫細(xì)胞化學(xué)法鑒定神經(jīng)細(xì)胞特異性抗原標(biāo)記神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)、微管相關(guān)蛋-2(MAP-2)和神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)的表達(dá)；MTT 法檢測(cè)各組誘導(dǎo)劑不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)神經(jīng)元樣細(xì)胞活力的影

3、響，TUNEL、Annexin V-FITC/PI 凋亡試劑盒測(cè)定誘導(dǎo)后各組細(xì)胞凋亡率。
　　 結(jié)果:1、成功分離培養(yǎng)出hBMSCs，流式細(xì)胞儀檢測(cè)表面標(biāo)記為：CD29(+)、CD44(+)、CD105(+)、CD34(-)，分離培養(yǎng)的細(xì)胞符合hBMSCs表型特征；測(cè)定細(xì)胞周期示：高比例的G0/G1期細(xì)胞提示hBMSCs 具有高度分化潛能；
　　 2、免疫細(xì)胞化學(xué)法測(cè)定誘導(dǎo)后細(xì)胞：聯(lián)合組NSE、MAP-2陽性細(xì)胞比例高于

4、空白對(duì)照組、標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照組及藥物組（P<0.05)，且bFGF與藥物聯(lián)合組各組之間隨著藥物劑量的增加神經(jīng)元樣細(xì)胞特異性標(biāo)志物陽性率也增加（P<0.05)，GFAP表達(dá)陰性；
　　 3、MTT測(cè)定誘導(dǎo)后細(xì)胞活力示：聯(lián)合組細(xì)胞的活性較對(duì)照組高（P<0.05)，聯(lián)合組間隨著藥物劑量的增加細(xì)胞活性也增高（P<0.05)，且細(xì)胞活性高、存活時(shí)間延長。
　　 4、分別用TUNEL、Annexin V-FITC/PI 凋亡試劑盒檢測(cè)誘導(dǎo)后

5、各組細(xì)胞凋亡率，誘導(dǎo)后聯(lián)合組細(xì)胞凋亡率明顯下降（P<0.05)，且聯(lián)合組中隨著藥物劑量的增加凋亡率隨之下降（P<0.05)。
　　 結(jié)論：1、tPNS與bFGF 均可誘導(dǎo)hBMSCs分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞，聯(lián)合組更能有效誘導(dǎo)使其表達(dá)神經(jīng)細(xì)胞表面特異性抗原，且細(xì)胞活力較好，與藥物劑量呈正相關(guān)；
　　 2、tPNS與bFGF 誘導(dǎo)hBMSCs分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞后增殖能力強(qiáng)，聯(lián)合組誘導(dǎo)后細(xì)胞增殖能力及活力更強(qiáng)，存活時(shí)間明顯延長，與