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文檔簡介
1、在目的蛋白質的合適位點引入脯氨酸可以提高其熱穩(wěn)定性.通過將包含G247D突變的XhoI片斷置換入pTKD-GIG138P中,構建了7號淀粉酶鏈霉菌M1033所產(chǎn)木糖異構酶的雙突變體表達載體.分子模擬顯示,在無規(guī)卷曲的轉折處引入一個Pro,可以通過減少蛋白質骨架的靈活性而使周圍的構象結合得更緊密.將含有G138P單點突變和G138P-G247D雙點突變的GI結構基因,分別克隆入E.coli-鏈霉菌穿梭載體pHZ1272,成功構建了穿梭表達
2、載體pHZGIG138P和pHZGIG138P-G247D.通過原生質體的轉化,將pHZGIG138P和pHZGIG138P-G247D導入變鉛青鏈霉菌TK54菌株.根據(jù)vhb基因序列設計了包含有酶切位點的PCR引物.以pBR322-VHb質粒為模板,通過PCR擴增出vhb基因,將補平的PCR片段克隆入表達載體pBV220,然后轉化大腸桿菌DH5α菌株.通過XbaI和SacI將vhb基因片段切出后連入質粒pBI121,即pVHG.在轉基
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