減蛋綜合征病毒五鄰體蛋白與宿主蛋白GABARAPL1和RPSA的相互作用.pdf

1、減蛋綜合征病毒(Egg Drop Syndrome virus，EDSV)是直徑約為70-80nm的無包膜二十面體核衣殼的雙鏈DNA病毒。它屬于腺病毒科腺胸腺病毒屬。EDSV于1976年首次在荷蘭報道，當(dāng)時從產(chǎn)蛋雞中分離出該病毒。EDSV主要導(dǎo)致產(chǎn)蛋突然嚴(yán)重下降，以及外觀健康的產(chǎn)蛋雞產(chǎn)生無殼，薄殼，變色或變形的雞蛋。EDSV基因組含有33，213個堿基對。它也被稱為鴨腺病毒1(DAdV-1)，鴨腺病毒A型，腺病毒127。六鄰體、纖維蛋白

2、和五鄰體(penton)是EDSV的主要衣殼蛋白。
　　五鄰體蛋白在腺病毒入侵宿主細(xì)胞中起主要作用。腺病毒五鄰體基質(zhì)可以與細(xì)胞膜整合素結(jié)合并促進(jìn)病毒入侵到細(xì)胞中。EDSV蛋白可能與其他腺病毒penton蛋白在病毒復(fù)制中具有相同的功能，而不僅僅是結(jié)構(gòu)蛋白。因此，本研究的目的是表達(dá)五鄰體，研究五鄰體在病毒復(fù)制中的功能，并鑒定與五鄰體相互作用的宿主細(xì)胞蛋白。
　　為了找到EDSV五鄰體蛋白的受體或與其有相互作用的配體，應(yīng)用酵母雙雜

3、交(Y2H)方法進(jìn)行篩選。選擇10種蛋白作為潛在的蛋白相互作用候選物。為了確定相互作用，使用酵母回補實驗來消除誤差。結(jié)果表明10種蛋白質(zhì)中有4種蛋白質(zhì)即鴨GABA(A)受體相關(guān)蛋白1(GABARAPL1)，鴨蛋白質(zhì)核糖體蛋白SA(RPSA)，鴨蛋白整聯(lián)蛋白α4亞基(ITGA4)，鴨肌動蛋白-β(ACTB)與EDSV五鄰體蛋白有相互作用的配體。
　　選擇4種蛋白中的兩種蛋白(GABARAPL1和RPSA)驗證了它們與五鄰體蛋白之間的

4、相互作用，使用原核和真核表達(dá)系統(tǒng)來表達(dá)獵物蛋白和誘餌蛋白，然后通過體外GST pull-down實驗驗證其相互作用。結(jié)果表明GABARAPL1和RPSA與五鄰體蛋白具有直接相互作用。
　　在腺病毒的診斷中，常使用基于核酸的技術(shù)，例如通過PCR方法體外擴(kuò)增病毒DNA。為了檢測由EDSV引起的感染，建立了實時熒光環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)(RealAmp)。該方法與PCR相比具有一些優(yōu)點，包括靈敏性和特異性以及能夠通過熒光信號觀察在一個平臺上