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文檔簡介
1、目的:嚴重發(fā)熱伴血小板減少綜合征病毒(Severe fever with thrombocytopeniasyndrome virus,SFTSV)于2009年首次在國內(nèi)報道,它能夠引起發(fā)熱,血小板減少以及胃腸道癥狀。SFTSV經(jīng)蜱蟲叮咬傳播,主要發(fā)生在鄉(xiāng)村地區(qū),早期致死率高達10%-30%。目前還沒有針對SFTSV的特異性抗病毒藥物,同時,關于SFTSV致病機制的研究報道還較少,并有待進一步探討。
材料和方法:首先用含有SF
2、TSV的病人全血感染Vero細胞,利用Vero細胞獲取后續(xù)試驗所需要的病毒,利用SFTSV定量試劑盒測定病毒的載量;讓SFTSV感染Hela,Huh7.0,Huh7.5.1三種細胞,用實時熒光定量聚合酶鏈反應(Realtime PCR)檢測IFNα、IFNβ及下游干擾素刺激基因(interferon stimulated gene,ISG)的表達,觀察SFTSV對宿主固有免疫的影響;利用蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot,WB)檢測
3、SFTSV以及非結構蛋白(non-structural protein,NS)對p-STAT1的影響;利用雙熒光報告基因法檢測干擾素刺激反應原件(Interferon stimulated response element,ISRE)的活性,研究SFTSV以及其編碼的NS蛋白對外源性Ⅰ型IFN信號通路的影響,為闡明SFTSV致病機制奠定基礎。
結果:SFTSV能夠成功感染Vero,Hela,Huh7.0及Huh7.5.1四種細
4、胞;SFTSV在Hela細胞內(nèi)能夠激活宿主固有免疫,IFNα/β水平呈現(xiàn)升高趨勢,RIG-Ⅰ,TLR-3水平也相應升高,而在Huh7.0,Huh7.5.1細胞內(nèi)IFNα/β水平并沒有升高;SFTSV能夠通過NS蛋白抑制外源性Ⅰ型IFN信號通路:抑制p-STAT1的水平,抑制ISRE的活性;抑制ISGs的表達。
結論:研究結果表明SFTSV可能通過TLR-3信號途徑激活宿主固有免疫;SFTSV編碼的NS蛋白可能是SFTSV逃逸宿
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