對氧磷酶1的表達(dá)純化及其活性與功能的初步研究.pdf

1、對氧磷酶1（Paraoxonase1，PON1）是對氧磷酶(PON)家族的成員之一，它是鳥類和哺乳動物體內(nèi)存在的一種廣譜非專一性酯酶，能夠通過催化磷酸酯鍵的水解來降解氨基甲酸酯、有機(jī)磷酸酯和芳香羧酸酯，從而對水解有機(jī)磷類化合物及降解神經(jīng)毒劑發(fā)揮重要的作用。PON1也正是取自其特殊的毒理學(xué)意義。當(dāng)前越來越多的證據(jù)表明PON1不僅在催化有機(jī)磷水解方面作用巨大，而且在哺乳動物的脂質(zhì)代謝中也扮演著非常重要的角色，因此PON1與有機(jī)磷中毒、動脈粥

2、樣硬化、冠心病以及Ⅱ型糖尿病等多種疾病的發(fā)生與發(fā)展等有密切的關(guān)系。
　　 本研究成功構(gòu)建了PON1的重組表達(dá)菌株pET-32a-PON1，并用IPTG誘導(dǎo)表達(dá)出目的蛋白PON1。經(jīng)過Ni-NTA親和層析、陰離子交換層析和凝膠過濾層析等一系列純化后，得到純度達(dá)90％以上的目的蛋白。利用純化后的PON1蛋白免疫新西蘭雄兔制備多克隆抗體為純化家蠶生物反應(yīng)器中表達(dá)的PON1奠定基礎(chǔ)。
　　 同時利用家蠶桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)成功構(gòu)建了

3、重組桿狀病毒vBmPON1。將此病毒接種家蠶五齡幼蟲及蠶蛹，待其發(fā)病后，收集血淋巴對其進(jìn)行SDS-PAGE電泳和Western blotting分析，結(jié)果表明目的蛋白PON1在家蠶BmN細(xì)胞、五齡幼蟲及蠶蛹中均得到成功表達(dá)。
　　 利用對氧磷為底物將家蠶生物反應(yīng)器系統(tǒng)表達(dá)的PON1、大腸桿菌表達(dá)的PON1及家兔血清中天然存在的PON1分別進(jìn)行體外活性檢測。另外，我們對PON在小鼠體內(nèi)對敵敵畏的水解效果進(jìn)行了探索與比較，為今后進(jìn)一