魚類精子膜脂及膽固醇轉(zhuǎn)入對冷凍保存影響的研究.pdf

1、溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文魚類精子膜脂及膽固醇轉(zhuǎn)入對冷凍保存影響的研究姓名：呂剛申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：中藥學(xué)指導(dǎo)教師：黃長江201105溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文實驗結(jié)果顯示，這幾種魚精子在冷凍后活力大幅降低，PC、PE、SM及CHO四種脂質(zhì)也有顯著性減少，并且每種魚每種脂質(zhì)減少的幅度也不同。質(zhì)膜中膽固醇的增減與斑馬魚精子低溫冷凍的關(guān)系。首先，實驗以環(huán)糊精(CD)為載體，其與膽固醇一起處理后得到混合體稱之為CLC，CLC與精子一起在室溫下孵育

2、可將膽固醇轉(zhuǎn)入到精子質(zhì)膜中。實驗中分別用100p1濃度是15、3、5、7、10mg／ml的CLC處理107個精子后再低溫冷凍，結(jié)果表明5mg／mlCLC處理組凍后活力最高。接下來的實驗全部用5mg／mlCLC處理樣品。檢測處理組和對照組精子PC、PE、SM及CHO四種脂質(zhì)的含量，結(jié)果顯示處理組和對照組CHO的含量分別為4699／108sperm和14—108sperm，而PC、PE和SM含量相近。在活力實驗中發(fā)現(xiàn)凍后精子處理組活力大多數(shù)

3、能維持120s，而空白對照組僅能維持60s，并且處理組50％60％的活力也要高于對照組的30％40％。通過SY14／PI雙染色實驗，結(jié)果處理組的質(zhì)膜完整性能達(dá)到70％，而對照組只有40％50％。線粒體膜電位實驗結(jié)果顯示處理組與對照組的線粒體膜電位沒有顯著性差別。在人工受精實驗中，處理組和對照組的受精率和孵化率都明顯低于鮮精組，而處理組的受精率和孵化率比對照組略高但沒有顯著性差異?？傊?，CLC確實提高了精子中膽固醇含量、凍后精子活力和凍后

4、精子質(zhì)膜完整率，但在線粒體膜電位和受精率上作用不明顯，總體來說膽固醇增多是對斑馬魚精子低溫冷凍有利的。其次，直接用環(huán)糊精與斑馬魚精子一起孵育減少其膽固醇含量。同樣檢測處理組和對照組精子PC、PE、SM及CHO四種脂質(zhì)的含量，結(jié)果顯示處理組和對照組CHO的含量分別為98pg／108sperm和1491上g／108sperm，而PC、PE和SM也沒差別。在活力實驗中發(fā)現(xiàn)凍后精子處理組活力大多數(shù)僅能維持30s40s，而空白對照組能維持60s，