受體組分蛋白在靜壓力誘導(dǎo)VSMC增殖信號(hào)跨膜轉(zhuǎn)導(dǎo)中的作用.pdf

1、目的：探討受體組分蛋白(RCP)在靜壓力誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞（VSMC）增殖信號(hào)跨膜轉(zhuǎn)導(dǎo)中的作用。
　　方法：以鼠源性A10血管平滑肌細(xì)胞（A10VSMC）作為研究對(duì)象，用不同靜壓力（0，80，100，120，140，160，180 mmHg）在不同時(shí)間（0，3，6，12，24h）處理A10 VSMC，噻唑藍(lán)比色法（MTT）檢測細(xì)胞的活性；Western blot檢測增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）和RCP的蛋白表達(dá)；RT-PCR檢測RC

2、P mRNA水平。分別轉(zhuǎn)染RCP siRNA三條序列后，24小時(shí)后RT-PCR檢測RCP mRNA水平；48小時(shí)后Western blot檢測RCP蛋白表達(dá)水平。分別用小RNA干擾技術(shù)（siRNA）沉默或 CGRP誘導(dǎo) RCP基因的表達(dá)，在靜壓力作用下，MTT法檢測細(xì)胞的活性；Western blot檢測PCNA的蛋白表達(dá)。用終濃度為10nm的CGRP孵育A10 VSMC30min和靜壓力處理5min、30min、1h、3h和6h，We

3、stern blot檢測p-Akt水平，免疫共沉淀（co-IP）和Western blot檢測RCP/Caveolin-1、RCP/Gas的蛋白相互作用。
　　結(jié)果：靜壓力呈壓力和時(shí)間依賴性地增加A10 VSMC活性和PCNA蛋白表，并在120mmHg靜壓力和6小時(shí)達(dá)到最大。靜壓力呈壓力和時(shí)間依賴性地促進(jìn)A10 VSMC中RCP mRNA和蛋白表達(dá)，并在120mmHg靜壓力和6小時(shí)達(dá)到最大。RCP siRNA-3沉默率達(dá)70％。在

4、靜壓力作用下，與scrambled siRNA組相比，RCP siRNA組的A10 VSMC活性和PCNA蛋白表達(dá)明顯增加（P<0.05）。在靜壓力作用下，與no-CGRP組相比，CGRP預(yù)孵育A10 VSMC組的VSMC活性和PCNA蛋白表達(dá)明顯降低（P<0.05）。與control組相比，CGRP組A10 VSMC中的Caveolin-1表達(dá)增加（P<0.05），而靜壓力組的Caveolin-1表達(dá)降低（P<0.05）；Caveol