CCL20-CCR6趨化因子在Il-17介導(dǎo)的大鼠退變椎間盤自身免疫反應(yīng)機制研究.pdf

1、目的:
　　輔助性T淋巴細(xì)胞17(T helper17,Th17)細(xì)胞及其相關(guān)細(xì)胞因子白介素17(interleukin17,IL-17)在自身免疫性疾病中發(fā)揮重要作用。先前研究表明退變椎間盤中有大量Th17細(xì)胞的聚集，并且Th17細(xì)胞及其相關(guān)細(xì)胞因子IL-17介導(dǎo)了椎間盤炎性退變過程。然而，Th17細(xì)胞被趨化、遷移至局部退變椎間盤組織的病理生理機制卻有待闡明。本實驗應(yīng)用大鼠椎間盤退變模型，探討CCL20/CCR6趨化因子系統(tǒng)是否

2、參與Th17細(xì)胞在退變椎間盤組織的趨化遷移作用。
　　方法:
　　本研究中，我們首先建立WISTAR大鼠椎間盤針刺退變模型和WISTAR大鼠自體髓核移植模型。所有清潔級WISTAR大鼠按照隨機分組的原則分為4個組:假手術(shù)組（sham surgery group），針刺退變組（needle puncture group，NPgroup），假手術(shù)移植組(sham surgery+autologous nucleus pulpos

3、us application group，sham-ANPA group)和針刺移植組(needle puncture+autologous nucleus pulposusapplication group，NP-ANPA group)。取術(shù)后5周時間點，用蘇木素-伊紅染色(HE染色)觀察各組大鼠椎間盤組織形態(tài)學(xué)變化;免疫組織化學(xué)染色檢測各組WISTAR大鼠椎間盤中CCL20、IL-17、CCR6的表達，觀察上述指標(biāo)在大鼠退變椎間盤的

4、表達變化及定位。各組大鼠椎間盤組織，液氮保存后用蛋白印跡法(Western blot)檢測各組大鼠椎間盤組織CCL20、IL-17、CCR6蛋白表達水平。應(yīng)用real-time PCR檢測大鼠椎間盤組織中CCL20、IL-17、CCR6 mRNA含量變化。酶聯(lián)免疫吸附試驗(Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)檢測各組大鼠外周血血清中IL-17濃度水平。根據(jù)各組大鼠CCL20、CCR6及IL-1

5、7表達變化進行皮爾森(Pearson)相關(guān)分析。
　　結(jié)果:
　　1.免疫組織化學(xué)染色結(jié)果表明，在針刺退變組和針刺移植組WISTAR大鼠退變椎間盤組織中，趨化因子CCL20、CCR6及IL-17的表達與對照組相比顯著升高，同時存在統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05);針刺移植組WISTAR大鼠退變椎間盤中CCL20、CCR6、IL-17的表達明顯高于針刺退變組，兩組比較有顯著性差異(P＜0.05)。
　　2.Western bl

6、ot結(jié)果顯示針刺退變組和針刺移植組的椎間盤組織中CCL20、CCR6、IL-17蛋白含量水平較對照組顯著提高并存在顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05);與針刺退變組相比，針刺移植組WISTAR大鼠退變椎間盤中CCL20、CCR6和IL-17蛋白表達量明顯增多(P＜0.05)。
　　3.Real-time PCR結(jié)果顯示針刺退變組和針刺移植組WISTAR大鼠退變椎間盤組織中CCL20、CCR6、IL-17 mRNA的表達含量與假手術(shù)組相比

7、顯著提高，并且兩組比較有顯著統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）;針刺移植組WISTAR大鼠退變椎間盤中CCL20、CCR6、IL-17mRNA的含量與針刺退變組相比明顯高表達（P＜0.05）。
　　4.ELISA結(jié)果顯示，WISTAR大鼠外周血中，與對照組相比，針刺退變組和針刺移植組中IL-17濃度水平明顯提高并存在顯著統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）。針刺移植組大鼠血清中IL-17濃度與針刺退變組相比明顯升高（P＜0.05）。
　　5.

8、皮爾森相關(guān)分析結(jié)果顯示，各組大鼠CCL20、CCR6及IL-17表達變化存在顯著性相關(guān)性（CCL20 vs.IL-17,r=0.916,P＜0.001;CCR6 vs.IL-17,r=0.868,P＜0.001）
　　結(jié)論:
　　IL-17是大鼠退變椎間盤自身免疫反應(yīng)過程中重要的致炎因子。退變的椎間盤組織中髓核細(xì)胞表達CCL20增多，Th17細(xì)胞通過CCL20-CCR6趨化因子被趨化遷移至退變的WISTAR大鼠椎間盤組織中。

9、游移至局部椎間盤的Th17細(xì)胞分泌大量致炎因子激活退變椎間盤髓核組織自身免疫反應(yīng)，椎間盤局部的致炎微環(huán)境進一步刺激退變的髓核細(xì)胞分泌更多的CCL20。同時CCL20-CCR6趨化因子系統(tǒng)趨化、遷移更多的Th17細(xì)胞至退變椎間盤組織，激活、級聯(lián)放大椎間盤組織自身免疫反應(yīng)和局部炎癥反應(yīng)，如此便形成了一個CCL20-CCCR6-IL-17正反饋環(huán)路。CCL20-CCR6趨化因子在Th17細(xì)胞及其細(xì)胞因子IL-17被趨化、遷移至大鼠退變椎間盤過