肺炎患者IL-17B水平升高及其介導(dǎo)支氣管上皮細(xì)胞表達(dá)趨化因子IL-8的免疫機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　肺炎已成為危害人類健康的主要疾病之一。目前已有證據(jù)表明肺組織細(xì)胞在調(diào)控肺部免疫和感染中發(fā)揮著重要作用。支氣管上皮細(xì)胞是抵御外部病原體的第一道防御屏障，肺成纖維細(xì)胞在肺結(jié)締組織中含量豐富，是肺間質(zhì)和血管的細(xì)胞通訊橋梁。肺部感染時(shí)，肺組織細(xì)胞通過分泌促炎細(xì)胞因子、生長因子、趨化因子以及相應(yīng)的抗菌物質(zhì)積極參與固有性和獲得性免疫應(yīng)答。研究肺組織細(xì)胞在肺部免疫和感染的作用，有助于預(yù)測、預(yù)防和治療肺炎及其他呼吸道疾病。IL-17B

2、作為IL-17家族中的一員，雖在免疫性胃腸道疾病中有所提及，但其在肺部免疫中的作用尚未有報(bào)道。因此，研究肺部感染中肺組織細(xì)胞如何對(duì)IL-17B產(chǎn)生免疫應(yīng)答以及通過何種分子機(jī)制調(diào)控該途徑，有助于我們了解肺部感染免疫的進(jìn)程，為臨床治療提供策略。
　　方法：
　　收集社區(qū)獲得性肺炎（CAP）患者和正常血液標(biāo)本（成人肺炎患者/正常成人=37/14，兒童肺炎患者/正常兒童=28/14），ELISA檢測兩組標(biāo)本IL-17B和IL-8水平

3、差異及相關(guān)性；Q-PCR檢測IL-17B處理人支氣管上皮細(xì)胞（BEAS-2B）和人肺成纖維細(xì)胞（HLF）后，相關(guān)細(xì)胞因子 mRNA的表達(dá)差異；TNF-α、IFN-γ單獨(dú)或與IL-17B聯(lián)合處理人支氣管上皮細(xì)胞24小時(shí)后，ELISA檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-8水平的變化；用信號(hào)通路抑制劑處理人支氣管上皮細(xì)胞1小時(shí)后，再用 IL-17B處理細(xì)胞24小時(shí)，ELISA檢測細(xì)胞上清 IL-8水平變化；IL-17B處理BEAS-2B不同時(shí)間點(diǎn)，wes

4、tern blot檢測細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路蛋白的磷酸化水平；分別用銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和肺炎鏈球菌構(gòu)建小鼠肺炎模型，ELISA檢測小鼠支氣管肺泡灌洗液和血清中IL-17B和IL-8的水平。
　　結(jié)果：
　　CAP患者血清中IL-17B和IL-8水平顯著升高且兩者呈正相關(guān)。IL-17B可誘導(dǎo)人支氣管上皮細(xì)胞表達(dá)IL-8顯著升高，且具有一定的劑量依賴性。TNF-α可顯著增強(qiáng)IL-17B誘導(dǎo)BEAS-2B表達(dá)IL-8，

5、而IFN-γ則顯著降低IL-17B刺激BEAS-2B產(chǎn)生IL-8。IL-17B刺激人支氣管上皮細(xì)胞5分鐘后，NF-κ B、Akt、ERK、P38 MAPK的磷酸化水平顯著升高；采用NF-κ B抑制劑、Akt抑制劑、ERK抑制劑、P38 MAPK抑制劑聯(lián)合 IL-17B處理 BEAS-2B組較 IL-17B單獨(dú)處理組的IL-8水平顯著降低，且NF-κ B、Akt、ERK、P38 MAPK磷酸化水平顯著減弱。不同細(xì)菌構(gòu)建的小鼠肺炎模型中，I