CCL20-CCR6系統(tǒng)在Th17細胞介導的椎間盤源性腰腿痛中的作用機制研究.pdf

1、目的
　　腰椎間盤突出癥(lumbardischerniation，LDH)是臨床常見病和多發(fā)病，據(jù)目前的統(tǒng)計資料表明，腰椎間盤突出癥患者約占因腰腿痛就診患者的15％，美國每年約有570萬人忠有此癥，其中40％被診斷為腰椎間盤突出癥，隨著人們生活節(jié)奏的加快，腰椎間盤突出癥的發(fā)病率呈逐年增高的趨勢，由于椎間盤突出所致的疼痛更是影響患者生活質(zhì)量的重要因素。因此，充分了解椎間盤突出癥疼痛的病理生理機制，尋找導致椎間盤突出引起腰腿疼痛的致

2、病因素，對于探索最有效、最適當?shù)闹委煵呗?，改善臨床治療效果具有重要意義。
　　方法
　　選擇2012年4月～2012年7月在山東大學齊魯醫(yī)院骨外科住院并經(jīng)影像學檢查和臨床表現(xiàn)確診的腰椎間盤突出癥患者。50例患椎間盤突出癥病人的椎間盤組織以及3例脊柱外傷病人的椎間盤組織，根據(jù)影像學檢查和臨床表現(xiàn)分為突出組(GroupP，n=20)、脫出組(GroupE，n=30)和正常對照組(NormalControl，n=3)。用免疫組織化

3、學及免疫熒光雙標技術(shù)檢測退變椎間盤組織中CCL20、TNF-α、Th17細胞（CD4+IL-17A+和CD4+CCR6+）等的表達;8例患椎間盤突出癥病人的髓核組織用于髓核細胞培養(yǎng)，培養(yǎng)髓核細胞時在上清液中加入Th17相關(guān)細胞因子（IL-17A和TNF-α），收集上清液用ELISA法檢測CCL20蛋白的濃度，收集髓核細胞用RT-PCR法檢測CCL20mRNA的表達水平;另外收集20例患椎間盤突出癥病人術(shù)前、術(shù)后的外周血標本和15例正常健

4、康人的外周血標本用來做流式細胞儀檢測，流式細胞儀技術(shù)檢測外周血中Th17細胞所占的比例以及Th17細胞表面CCR6的陽性率，ELISA檢測血清中IL-17的濃度，術(shù)前、術(shù)后Th17、IL-17、VAS評分及其變化做相關(guān)性統(tǒng)計分析。
　　結(jié)果
　　1.免疫組織化學染色顯示在突出組和脫出組的椎間盤組織中CCL20、TNF-α的表達較對照組顯著提高并存在顯著性差異(p＜0.001);免疫熒光雙標染色結(jié)果顯示僅在脫出組椎間盤組織中檢

5、測到Th17細胞的表達，而在突出組和正常對照組未檢測到。
　　2.Th17細胞相關(guān)細胞因子（IL-17和TNF-α）能顯著提高髓核細胞分泌CCL20的能力，并且存在明顯的劑量依從性。
　　3.流式細胞儀技術(shù)檢測結(jié)果示，在病人外周血中，與對照組相比，Th17細胞的表達(1.039±0.156％vs.2.973±0.689％，P＜0.0001)及其表面CCR6的陽性率(28.75±2.09％vs.59.69±4.48％，P＜0.

6、0001)均有顯著提高。
　　4.相關(guān)性分析結(jié)果示，術(shù)前、術(shù)后Th17、IL-17、VAS評分以及手術(shù)前后其變化值之間存在顯著相關(guān)性:術(shù)前（Th17vs.IL-17，r=0.723，p＜0.01;Th17vs.VAS，r=0.805，p＜0.01;IL-17vs.VAS，r=0.675，p＜0.01）、術(shù)后（分別為r=0.551，p＜0.01;r=0.536，p＜0.01;r=0.507，p＜0.01）、手術(shù)前后變化值(分別為r=

7、0.729,p＜0.01;r=0.732,p＜0.01;r=0.536,p＜0.01)。
　　結(jié)論
　　CCL20/CCR6系統(tǒng)在Th17細胞被趨化至退變的椎間盤組織中起重要作用，Th17細胞被趨化到局部后，其細胞因子促進退變的髓核細胞分泌CCL20，通過CCL20/CCR6系統(tǒng)趨化更多的Th17細胞至退變椎間盤，如此便形成了一個正反饋環(huán)路，趨化至局部的Th17細胞能分泌大量炎性細胞因子并促進其他炎癥細胞分泌炎性細胞因子，在