海洋細(xì)菌YSC-1及其高鐵還原酶的研究.pdf

1、中科院青島海洋生態(tài)研究所的肖天教授向本實驗室贈送一株好氧海洋細(xì)菌YSC-1，該菌可在細(xì)胞內(nèi)合成電子致密顆粒。 本實驗室與肖天教授實驗室合作，對該菌形態(tài)及生理生化特性進(jìn)行研究，初步鑒定該菌屬于原核生物α-亞綱，與Arcticseawaterbacterium和Roseobacter屬親緣關(guān)系最近。通過原子吸收法測定其細(xì)胞內(nèi)鐵元素含量，并與大腸桿菌進(jìn)行了比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，YSC-1菌體內(nèi)含鐵量超過大腸桿菌10倍以上，對鐵元素具有較強(qiáng)的

2、富集能力。 通過生長條件單因素實驗及培養(yǎng)基成分正交實驗確定了YSC-1的培養(yǎng)條件，其培養(yǎng)基初始pH為7.5，培養(yǎng)溫度為24℃，搖床轉(zhuǎn)速為200rpm，鐵源為奎尼酸鐵；使用天然海水配制培養(yǎng)基營養(yǎng)成分為：酵母膏1.0g/L，蛋白胨5.0g/L，奎尼酸鐵10μM。通過這一階段工作，使YSC-1在K2216培養(yǎng)基中的菌體密度由原來的0.7左右提高至1.2左右。 通過DEAE-Sepharose(fastflow)、CM-Seph

3、arose(fastflow)、Q-Sepharose(fastflow)柱層析等分離方法，從YSC-1菌株的細(xì)胞破碎液中純化到一個高鐵還原酶組分，標(biāo)記為Ysc，經(jīng)SDS-PAGE檢測分子量為36,458Da。經(jīng)過基本酶學(xué)性質(zhì)研究，確定其等電點為6.3，最適作用pH為6.0，在pH7.0左右的中性環(huán)境下比較穩(wěn)定；Ysc熱穩(wěn)定性較差，環(huán)境溫度超過30℃酶活迅速喪失。金屬離子對酶活影響表明，Mn2+、Zn2+、Mg2+、K+、Ca2+、Na