光合細菌羰基還原酶不對稱加氫催化體系的研究.pdf

1、隨著人們對不對稱合成手性化合物的深入研究，生物不對稱加氫發(fā)展為現代研究的熱點和焦點。生物催化一般選擇微生物整體細胞為催化劑，因其具有反應條件溫和、效率高、產物比較單一等優(yōu)點，后來研究發(fā)現其反應體系中存在酶位點選擇性低、底物濃度的限制等問題。目前，研究人員利用分離純化的羰基還原酶還原潛手性化合物，不僅可以增加酶與底物的接觸機會，提高光學純度，而且可以進一步了解酶的作用機制，因此酶法還原再次掀起了國內外研究手性化合物的新浪潮。本課題一方面從

2、光合細菌中分離純化出羰基還原酶，并對其酶學性質進行研究;另一方面是建立羰基還原酶催化體系，并優(yōu)化其催化條件，選擇催化的最適底物，為研究酶催化機制和實現工業(yè)化生產奠定基礎。
　　其主要內容如下:
　　1.通過超聲破碎、硫酸銨沉淀、DEAE-Sephadex A-25陰離子交換層析三步純化分離得到一種較純的依賴于輔酶NADPH的羰基還原酶。該酶的比活從0.9U/mg提高到36U/mg，純化倍數為40。對其進行SDS-PAGE電泳

3、分析，顯示一條帶，并測得其相對分子量約為37kD。
　　2.采用紫外測定酶活，對該酶的酶學性質進行研究。結果表明:酶的最適pH值為8，最適溫度為37℃，在pH值為7～9之間比較穩(wěn)定，但其熱穩(wěn)定性較低。該酶對苯乙酮的米氏常數Km值和最大反應速率Vmax分別為0.26mmol/L和2.4μmol/(min mg)。
　　3.構建了輔酶再生體系、羰基還原酶催化苯乙酮體系以及酶催化與輔酶再生偶聯體系，并對催化體系進行優(yōu)化。結果表明，