膿毒癥合并ALI的分子標(biāo)志物篩選.pdf

1、目的:膿毒癥合并急性肺損傷(ALI)的早期診斷及有效的治療對疾病預(yù)后非常重要，但目前人們對該疾病的相關(guān)分子標(biāo)志物及機(jī)理認(rèn)識還十分有限。本研究應(yīng)用基因芯片技術(shù)，高通量檢測外周血miRNA，研究膿毒癥合并ALI具有差異表達(dá)的miRNA，進(jìn)行篩選，討論這些miRNA能否可以應(yīng)用于膿毒癥合并ALI的診斷和預(yù)測;同時，研究膿毒癥合并ALI外周血中TLR4及IL-34、IL-36的表達(dá)變化、三者間是否具有相關(guān)性，以及其與疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)性，為膿毒

2、癥合并ALI的機(jī)制研究提供理論基礎(chǔ)，為臨床膿毒癥合并ALI的預(yù)測提供新的研究思路。
　　方法:收集內(nèi)蒙古包鋼醫(yī)院院呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科收治的膿毒癥合并ALI患者和健康體檢者的外周血液標(biāo)本（正常組共11例，膿毒癥合并ALI組共18例）。Trizol法提取標(biāo)本（外周血）的總RNA，使用紫外分光光度儀(Nanodrop1000)測定出總RNA的質(zhì)量，篩選出符合實驗標(biāo)準(zhǔn)的血液樣品（正常組6例，膿毒癥合并ALI組3例）。使用miRNA完全標(biāo)記

3、和Hyb工具包的試劑盒來進(jìn)行基因芯片雜交，用Agilent Feature Extraction軟件對雜交圖片進(jìn)行分析，用GeneSpring軟件處理分析并篩選出膿毒癥合并ALI組和正常對照組之間有明顯差異表達(dá)的miRNA(以P值＜0.05和FC(abs)值＞2為條件），用DAVID工具對靶基因相關(guān)的功能進(jìn)行預(yù)測。2％ EDTA抗凝劑的試管采集外周靜脈血（正常組5例，膿毒癥合并ALI組15例），離心取上清，用于ELISA法檢測TLR4、

4、IL-34、IL-36。
　　結(jié)果:1.Agilent芯片高通量檢測發(fā)現(xiàn)膿毒癥合并ALI中共有320個miRNA存在差異表達(dá)，miRNA在膿毒癥合并ALI組中上調(diào)的有138個，下調(diào)的有182個;包括7個10倍以上的上調(diào)基因:miRNA-619-5p、miRNA-6881-3p、miRNA-449b-3p、miRNA-3657、miRNA-4254、miRNA-34b-3p和miRNA-1287-5p;3個10倍以上的下調(diào)基因:mi

5、RNA-362-5p、miRNA-892b和miRNA-625-5p。這些miRNA相關(guān)的預(yù)測靶基因數(shù)量龐大，經(jīng)篩選獲得了大約有3500個共有的靶基因;靶基因功能分析結(jié)果顯示，主要與調(diào)控生物膜離子通道有關(guān)。2.膿毒癥合并ALI的外周血中TLR4、IL-34、IL-36均顯著提高，具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。3.經(jīng)Pearson相關(guān)分析，IL-34濃度與TLR4濃度呈正相關(guān)，IL-36濃度與TLR4濃度不相關(guān)，IL-34濃度與IL-3

6、6濃度呈正相關(guān)。
　　結(jié)論和意義:膿毒癥合并ALI中共有320個miRNA存在差異表達(dá)，此中包含上調(diào)138個，下調(diào)182個;這些miRNA共有的靶基因大約有3500個，主要與調(diào)控生物膜離子通道有關(guān)。膿毒癥合并ALI的外周血中TLR4、IL-34、IL-36均顯著提高;IL-34濃度與TLR4濃度呈正相關(guān)，IL-36濃度與TLR4濃度不相關(guān)，IL-34濃度與IL-36濃度呈正相關(guān)。在膿毒癥合并ALI炎癥反應(yīng)中IL-34可能對TLR4