老鼠簕醇提物對(duì)小鼠的急性毒性及其治療鴨乙型肝炎的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 1.從紅樹(shù)植物老鼠筋全株制備老鼠筋醇提物，并檢測(cè)其對(duì)小鼠的急性毒性反應(yīng)，計(jì)算半數(shù)致死劑量(LD50)，以此為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的劑量設(shè)計(jì)提供依據(jù)。 2.觀察老鼠筋醇提物治療鴨乙型肝炎的療效。 方法： 1.采用70％乙醇，以乙醇冷浸法制備老鼠筋70％醇提物。Bliss法測(cè)定其急性毒性，計(jì)算LD50。 2.觀察老鼠筋醇提物抗DHBV的作用：用DHBV DNA強(qiáng)陽(yáng)性血清(經(jīng)PCR檢測(cè)，瓊脂糖電泳顯示相應(yīng)位

2、置條帶比較亮)O．2ml注射至1日齡雛鴨的腹腔，15天后用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)法(FQ—PCR法)篩選出DHBV強(qiáng)陽(yáng)性鴨，建立人工感染鴨乙型肝炎病毒的動(dòng)物模型。采用分層隨機(jī)抽樣法將人工感染DHBV的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分到5組。其中4個(gè)治療組分別給予高劑量老鼠筋醇提物(2.Og/kg·日)、中劑量老鼠簕醇提物(1.0g/kg·日)、低劑量老鼠筋醇提物(0.5g/kg·日)和陽(yáng)性對(duì)照藥物阿昔洛韋(ACV)治療，設(shè)1組模型對(duì)照，以雙蒸水代替藥物，再

3、另設(shè)1組不做任何處理的、經(jīng)PCR法檢測(cè)DHBV為陰性的鴨子作正常對(duì)照，也給于等量的雙蒸水。每組12只，各組雛鴨均灌胃14天。于用藥前(TO)、用藥后7天(T7)、用藥后14天(T14)、停藥后5天(P5)分別采血，采用FQ—PCR法檢測(cè)血清中DHBV DNA的含量，用ELISA法測(cè)定血清中DHBsAg、DHBeAg的OD值，同時(shí)檢測(cè)血清中的轉(zhuǎn)氨酶(AST，ALT)，最后處死動(dòng)物取肝臟做病理檢查。 3.數(shù)據(jù)分析：DHBV DNA、

4、DHBsAg與DHBeAg、ALT與AST的檢測(cè)數(shù)據(jù)采用重復(fù)測(cè)量資料的方差分析方法，藥物對(duì)鴨肝病理影響的數(shù)據(jù)采用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。數(shù)據(jù)處理分析采用SPSS13.0和PEMS 3.1統(tǒng)計(jì)軟件。 結(jié)果： 1.以19kg老鼠筋生藥制備老鼠筋醇提物844g，急性毒性實(shí)驗(yàn)表明其對(duì)小鼠的LDso為20.04g/kg，95％可信區(qū)間為17.66～22.74g/kg，表明老鼠簕醇提物為無(wú)毒級(jí)。 2、老鼠筋醇提物抗鴨乙型肝炎病

5、毒(DHBV)的作用： (1)用藥后只有ACV組比模型對(duì)照組的血清DHBV DNA顯著降低(P<0.001)，而老鼠筋醇提物三個(gè)治療組與模型對(duì)照組的DHBV DNA水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，故不能判定老鼠筋醇提物有直接抑制DHBV的作用。 (2)治療后，各治療組與模型對(duì)照組相比，血清DHBsAg、DHBeAg OD值的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，未發(fā)現(xiàn)老鼠簕醇提物具有降低血清DHBsAg和DHBeAg的活性。 (3

6、)用藥后，ACV組、老鼠筋醇提物高劑量和中劑量組的ALT活性比模型對(duì)照組低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；同時(shí)，還發(fā)現(xiàn)．ACV組和老鼠筋醇提物高劑量組動(dòng)物的AST活性比模型對(duì)照組低(P<0.01)。表明ACV和老鼠筋醇提物具有降低ALT、AST水平，改善肝功能的作用，且老鼠筋醇提物的保肝作用與劑量大小和時(shí)間有一定的關(guān)系。 (4)肝臟病理檢查發(fā)現(xiàn)，老鼠筋醇提物高劑量組和．ACV組對(duì)DHBV引起的肝損傷有顯著的保護(hù)作用(P<0.