乙型肝炎病毒PreS-S突變對(duì)聚乙二醇干擾素治療慢性乙型肝炎持續(xù)應(yīng)答的影響及其機(jī)制的研究.pdf

1、研究背景:慢性乙型肝炎抗病毒治療的療效預(yù)測(cè)及預(yù)防停藥復(fù)發(fā)是近年國(guó)內(nèi)外研究熱點(diǎn)，目前乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)滴度常作為乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)陽(yáng)性患者采用聚乙二醇干擾素抗病毒治療停藥的判斷指標(biāo)。由于乙型肝炎病毒(HBV)自身的高度變異性，HBsAg變異是否會(huì)對(duì)治療應(yīng)答和停藥復(fù)發(fā)產(chǎn)生影響也引起了研究者的關(guān)注。另外對(duì)聚乙二醇干擾素抗病毒治療48周應(yīng)答不佳的慢性乙型肝炎患者，其優(yōu)化治療方案及療效預(yù)測(cè)指標(biāo)也尚不明確。
　　

2、研究目的:1、研究慢性乙型肝炎患者采用聚乙二醇干擾素抗病毒治療過(guò)程中血清HBV分離株包膜蛋白前S/S區(qū)(PreS/S)準(zhǔn)種的變異情況，并進(jìn)一步分析突變株對(duì)病毒生物學(xué)表型產(chǎn)生的影響以探討引起停藥復(fù)發(fā)的病毒學(xué)分子機(jī)制。2、分析在聚乙二醇干擾素延長(zhǎng)抗病毒治療過(guò)程中患者血清HBsAg、 HBeAg及乙肝病毒DNA(HBVDNA)的變化情況，以探尋更好的抗病毒治療持續(xù)應(yīng)答的預(yù)測(cè)模型，為48周聚乙二醇干擾素治療應(yīng)答不佳的慢性乙型肝炎患者的優(yōu)化治療方

3、案提供依據(jù)。
　　研究方法:本研究第一部分共收集98例聚乙二醇干擾素治療12個(gè)月e抗原陽(yáng)性的慢性乙型肝炎患者，其中46例在治療結(jié)束達(dá)到e抗原血清學(xué)轉(zhuǎn)換，根據(jù)治療3個(gè)月是否S抗原≤1500 IU/ml或6個(gè)月HBsAg≤300 IU/ml且下降大于1 log，分為高S抗原滴度組及低S抗原滴度組各11例，收集兩組患者在治療過(guò)程中及復(fù)發(fā)時(shí)的系列血清標(biāo)本，分析停藥復(fù)發(fā)患者在治療過(guò)程中及復(fù)發(fā)時(shí)PreS/S區(qū)準(zhǔn)種的動(dòng)態(tài)變化，體外真核表達(dá)觀察P

4、reS/S區(qū)突變對(duì)HBsAg抗原性的影響，進(jìn)一步通過(guò)細(xì)胞熒光素酶實(shí)驗(yàn)觀察PreS區(qū)突變對(duì)S區(qū)啟動(dòng)子的影響，并利用反式互補(bǔ)技術(shù)觀察PreS/S區(qū)突變對(duì)病毒復(fù)制及分泌的影響，采用實(shí)時(shí)熒光Taqman雙探針技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞共價(jià)閉合環(huán)狀DNA(cccDNA)病毒池的變化，及細(xì)胞免疫熒光技術(shù)觀察包膜蛋白在細(xì)胞中的分布情況。
　　本研究第二部分納入81例聚乙二醇干擾素治療48周應(yīng)答不佳的HBeAg陽(yáng)性的慢性乙型肝炎患者，延長(zhǎng)治療至96周，其中58

5、例患者繼續(xù)采用聚乙二醇干擾素單藥治療，23例患者加用核苷（酸）類(lèi)似物聯(lián)合治療。在治療基線、24周、48周、72周、96周及停藥隨訪72周各時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)血清HBsAg、HBeAg及HBV DNA水平。
　　結(jié)果:第一部分:1、11例高S抗原滴度組停藥觀察48周病毒學(xué)反彈患者為7例(7/11，63.6％)，而低S抗原滴度組11例患者有4例出現(xiàn)病毒學(xué)反彈(4/11，36.4％)，并且低S抗原滴度組復(fù)發(fā)的患者存在PreS/S變異株的進(jìn)化，其

6、中2例基因C型的患者PreS1 G35R+F67V變異株在抗病毒治療過(guò)程中及停藥復(fù)發(fā)后逐漸成為優(yōu)勢(shì)株，而另2例基因B型的患者均出現(xiàn)了S P127T變異位點(diǎn)。2、體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)P127T突變能降低乙肝病毒的抗原性，可造成HBsAg的檢測(cè)滴度下降;而PreS1G35R+F67V突變株在胞內(nèi)合成的cccDNA較野毒株增加，進(jìn)一步分析表明這種發(fā)生在S啟動(dòng)子區(qū)的突變可通過(guò)下調(diào)S啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄活性導(dǎo)致主蛋白(SHBs)表達(dá)量的降低，從而改變大蛋白(LH

7、Bs)/SHBs的比例，影響包膜蛋白的表達(dá)及病毒的分泌，促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)cccDNA合成。
　　第二部分:1、在聚乙二醇干擾素延長(zhǎng)治療的81例患者中有26例(32.1％)達(dá)到持續(xù)病毒學(xué)應(yīng)答（停藥隨訪72周患者血清HBV DNA載量低于檢測(cè)下限95 IU/ml），而對(duì)于聚乙二醇干擾素單藥治療或核苷（酸）類(lèi)似物聯(lián)合治療的患者間持續(xù)病毒學(xué)應(yīng)答率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;2、治療48周血清HBsAg小于1800IU/ml顯示出對(duì)持續(xù)病毒學(xué)應(yīng)答的預(yù)測(cè)價(jià)值，此

8、時(shí)持續(xù)應(yīng)答的受試者曲線下面積(AUC)為0.727，聯(lián)合72周血清HBsAg小于1500IU/ml及HBeAg陰轉(zhuǎn)其持續(xù)應(yīng)答的AUC值可提高至0.753。
　　結(jié)論:在慢性乙型肝炎患者聚乙二醇干擾素抗病毒治療過(guò)程中，PreS/S突變株可通過(guò)改變包膜蛋白的表達(dá)和病毒分泌，進(jìn)而促進(jìn)胞內(nèi)cccDNA合成或通過(guò)影響HBsAg的抗原性從而降低其與表面抗體的結(jié)合能力，為病毒長(zhǎng)期持續(xù)存在提供生存優(yōu)勢(shì)。對(duì)聚乙二醇干擾素治療48周應(yīng)答不佳的慢性乙型