黃芩苷對(duì)香煙煙氣提取物誘導(dǎo)細(xì)胞損傷的保護(hù)作用研究.pdf

1、目的：采用自主制備的煙氣提取物(cigarettesmokeextract,CSE)研究其細(xì)胞毒性,并探討黃芩苷對(duì)香煙煙氣提取物引起的人肺泡上皮細(xì)胞損傷的作用,為下一步開(kāi)發(fā)添加植物提取物的減毒藥煙提供一定實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 材料與方法：培養(yǎng)人肺泡上皮細(xì)胞A549,自主制備香煙煙氣提取物(CSE),確定相關(guān)的實(shí)驗(yàn)條件,用黃芩苷預(yù)處理細(xì)胞后,再用CSE刺激細(xì)胞,用MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞存活率,流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定細(xì)胞凋亡率,彗星實(shí)驗(yàn)觀察DNA損

2、傷,熒光法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)含量以觀測(cè)黃芩苷對(duì)煙氣的細(xì)胞毒保護(hù)作用。
　　 結(jié)果：1、確定實(shí)驗(yàn)條件:1％濃度的DMSO在實(shí)驗(yàn)時(shí)間內(nèi)(12h,24h,36h)肺泡上皮細(xì)胞的存活率與對(duì)照組相比沒(méi)有差異;試驗(yàn)用黃芩苷濃度(5mg/L,10mg/L,20mg/L,40mg/L)在24h內(nèi)肺泡上皮細(xì)胞的存活率與對(duì)照組相比較沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;隨著CSE濃度的增加和作用時(shí)間的延長(zhǎng),細(xì)胞存活率下降,各組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),短

3、時(shí)間實(shí)驗(yàn)條件下,50％CSE細(xì)胞存活率能滿足實(shí)驗(yàn)要求。2、50％CSE刺激細(xì)胞可以起細(xì)胞存活率下降、細(xì)胞內(nèi)活性氧含量升高、細(xì)胞凋亡率及DNA損傷增加;用黃芩苷預(yù)處理后這種損傷作用明顯降低,與陽(yáng)性對(duì)照組之間差異有顯著性(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：1、本研究采用的提取物制備條件及細(xì)胞染毒條件適用于香煙煙氣的細(xì)胞毒性研究。2、黃芩苷可以拮抗香煙煙氣提取物引起的細(xì)胞損傷,提高細(xì)胞的存活率,降低凋亡率,其原因可能與黃芩苷能降低細(xì)胞內(nèi)活