單細(xì)胞分析的新方法和腎上腺素細(xì)胞傳感器.pdf

1、第一章對(duì)單細(xì)胞分析技術(shù)及其在生命科學(xué)研究上的應(yīng)用性進(jìn)行了綜述。分別對(duì)毛細(xì)管電泳檢測(cè)的理論和技術(shù),2003年之后毛細(xì)管電泳檢測(cè)方法在分析單細(xì)胞上的應(yīng)用,微流控芯片在細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞操作和細(xì)胞內(nèi)組分測(cè)定等方面的應(yīng)用,影像學(xué)單細(xì)胞分析方法(包括熒光顯微術(shù)、共聚焦激光掃描顯微術(shù)、全內(nèi)反射熒光顯微術(shù))在單細(xì)胞分析上的應(yīng)用進(jìn)行了簡(jiǎn)單介紹及綜述。 第二章中我們建立了未見報(bào)道的微流控芯片電泳/柱端安培法檢測(cè)單個(gè)細(xì)胞中化學(xué)組分的方法。在這個(gè)方法中,我們?cè)陔p

2、T型微流控芯片上實(shí)現(xiàn)了單個(gè)細(xì)胞的電動(dòng)進(jìn)樣、轉(zhuǎn)移和破膜,并使用安置在雙T型微流控芯片的末端電化學(xué)檢測(cè)器對(duì)單個(gè)細(xì)胞中的物質(zhì)進(jìn)行了檢測(cè)。通過在微流控芯片的多通道體系中調(diào)整電壓,完成了單個(gè)原生質(zhì)體的電壓控制進(jìn)樣,并通過施加一個(gè)220 V/cm的直流電壓將細(xì)胞在芯片內(nèi)溶膜。細(xì)胞溶膜后,細(xì)胞中要檢測(cè)的物質(zhì)在微流控芯片的分離通道中進(jìn)行電泳分離,并在末端由電化學(xué)方法檢測(cè)。用這個(gè)方法測(cè)定了單個(gè)小麥(Cha9)愈傷組織細(xì)胞中的抗壞血酸。 第三章中我們?cè)O(shè)計(jì)了

3、利用熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)原理檢測(cè)CEA mRNA含量的方法。在這個(gè)方法中,將兩種熒光染料標(biāo)記的核酸探針與目標(biāo)mRNA雜交,雜交后兩種熒光染料的距離滿足產(chǎn)生FRET的條件,通過檢測(cè)核酸雜交后FRET的強(qiáng)度,可以測(cè)定目標(biāo)mRNA的含量。我們用這種方法測(cè)定了MGC 803胃癌細(xì)胞提取液中CEA mRNA的含量。 第四章中我們將第三章所研究的FRET測(cè)定mRNA的原理應(yīng)用到測(cè)定單個(gè)細(xì)胞內(nèi)mRNA的含量。在至今所有報(bào)道的定量測(cè)定單細(xì)胞中化

4、學(xué)組分分析的論文,細(xì)胞都是溶膜后再進(jìn)行測(cè)定。在這種情況下,檢測(cè)過程中細(xì)胞都已死亡。在絕大多數(shù)單細(xì)胞中化學(xué)組分定量分析的論文中,細(xì)胞是一個(gè)一個(gè)分析的,分析速度較慢,從細(xì)胞取樣到測(cè)到信號(hào)通常需要十幾分鐘到幾十分鐘,即分析通量很低。在本章中我們研究成功了一種高通量定量測(cè)定活細(xì)胞中mRNA的方法。在這個(gè)方法中,首先用毛地黃皂苷將細(xì)胞膜蝕孔,使熒光核酸探針能夠自由擴(kuò)散進(jìn)入細(xì)胞并同細(xì)胞內(nèi)的mRNA雜交,熒光探針與mRNA雜交后在激光的照射下產(chǎn)生FR