甲醛氣道刺激作用生物靶分子的研究.pdf

1、在Nielsen假設(shè)中有一個(gè)很重要的環(huán)節(jié),就是甲醛作為配子體對(duì)辣椒素受體的激活,但在Dr.Nielsen提出假設(shè)時(shí)辣椒素受體還沒(méi)有克隆出來(lái),對(duì)此假設(shè)的研究自然不夠方便.1997年辣椒素受體的克隆給Nielsen假設(shè)的研究帶來(lái)生機(jī),而美國(guó)加州大學(xué)舊金山分院細(xì)胞與分子藥理學(xué)研究所D.J.Julius博士(克隆辣椒素受體發(fā)明人)贈(zèng)送的VR1( 1型辣椒素受體)-cDNA使我們的研究工作得以開(kāi)展.這項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中,我們首先將大白鼠VR1-cDNA質(zhì)粒

2、轉(zhuǎn)入大腸桿菌中進(jìn)行擴(kuò)增,然后提取質(zhì)粒并酶切,然后在體外轉(zhuǎn)錄成VR1-mRNA,接著將VRl-mRNA注射到非洲爪贍卵母細(xì)胞中表達(dá)為蛋白質(zhì)受體,建立了實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ图?xì)胞,最后用雙微電極電壓鉗檢測(cè)此模型細(xì)胞.當(dāng)我們用辣椒素(capsaicin)(10<'-7>M)刺激模型細(xì)胞時(shí),細(xì)胞出現(xiàn)了電流變化,而加入capsazepine(10<'-5>M)(l型辣椒素受體特異性抑制劑)和capSaicin(10<'-7>M)(辣椒素)時(shí),模型細(xì)胞沒(méi)有反應(yīng)(