鵝IgA重鏈恒定區(qū)的原核表達和特異性抗體的制備與鑒定.pdf

1、免疫球蛋白（簡稱Ig）是體液免疫的重要調(diào)節(jié)分子，在動物體內(nèi)的免疫和生理調(diào)節(jié)中，發(fā)揮及其重要的作用，是動物體內(nèi)的免疫系統(tǒng)最為關(guān)鍵的組成物質(zhì)之一。對于鵝Ig分子水平方面的研究，國內(nèi)外相關(guān)研究報道甚少。
　　 本研究根據(jù)GenBank中鵝IgA重鏈恒定區(qū)(F)基因序列，設(shè)計引物，利用PCR技術(shù)擴增出F基因，構(gòu)建了含有F基因的重組原核表達質(zhì)粒pET-28a-GoIgA-C，目的基因1339bp。采用大腸桿菌表達系統(tǒng)獲得F的重組蛋白，并以

2、此為免疫原制備了抗F的重組蛋白多抗。分析了抗F的重組蛋白多抗與其他物種Ig之間的抗原抗體反應(yīng)，證實成功獲得了F的重組蛋白，為進一步研究鵝IgA結(jié)構(gòu)與功能特性奠定了物質(zhì)基礎(chǔ)。
　　 以Protein A親和層析純化的鵝血清Ig免疫4～6周雌性BALB/c小鼠，經(jīng)三次免疫后，將小鼠的脾細胞取出，與骨髓瘤細胞SP2/0進行融合。通過建立的間接ELISA方法篩選陽性雜交瘤細胞株，經(jīng)3～4次細胞亞克隆化后，最終獲得了4株分泌抗鵝Ig單克隆

3、抗體的雜交瘤細胞株，分別命名為3A4、2F12、4D4和4F12，然后對這4株雜交瘤細胞株進行了生物學(xué)方面的鑒定。通過單抗亞類鑒定試劑盒鑒定后，結(jié)果顯示4株雜交瘤細胞均為IgG。其中3株為IgG1，它們分別是:3A4、2F12和4F12，1株為IgG2b即4D4。4株雜交瘤細胞在體外具有穩(wěn)定分泌抗鵝Ig單克隆抗體的能力。Western blot和間接ELISA試驗結(jié)果均表明，3A4、2F12這兩株雜交瘤細胞分泌抗F的重組蛋白抗體，4D4