奇異果甜蛋白thaumatin基因二價載體在玉米中的共表達及其在酵母中的表達.pdf

1、Thaumatin是一種超甜蛋白，本實驗室將thaumatin和PDI上游分別連上CaMV35S啟動子，下游連上終止子，同時克隆于質粒pCAMBIA1302中，構建成二價協(xié)同表達載體pCAMBIA1302-TP，經測序證明了它們的正確性。將pCAMBIA1302-tha-PDI轉入農桿菌LBA4404，侵染玉米18紅新鮮幼胚及其誘導產生的胚性愈傷組織，擬通過組織培養(yǎng)技術得到玉米陽性植株。由于愈傷在侵染后分化條件的不成熟使本實驗未能如期得

2、到陽性植株，但摸索出了玉米幼胚誘導胚性愈傷的方法以及條件影響因素，并獨創(chuàng)了一套切實可行的農桿菌介導轉化玉米幼胚及胚性愈傷組織的可靠方法。鑒于奇異果甜蛋白thaumatin基因在玉米中難以表達的研究現(xiàn)狀，本文擬將thaumatin基因轉化釀酒酵母，獲得轉基因酵母菌株，再利用酵母菌的大規(guī)模發(fā)酵生產，獲得大量的有活性的甜味蛋白。通過基因工程技術，本文構建了酵母表達載體pDBLeu-thamatin，經測序證明其正確性。將pDBLeu-tham