人載脂蛋白基因apoAI在畢赤氏酵母中的表達(dá).pdf_第1頁(yè)
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1、從人血漿中提取ApoAI,產(chǎn)量低、步驟繁、成本高、安全性差,很難實(shí)現(xiàn)靶向藥物的產(chǎn)業(yè)化.因此,我們決定運(yùn)用畢赤氏酵母表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行ApoAI的表達(dá)研究,將獲得的rApoAI作為一個(gè)新的載體,為制備新型的靶向藥物創(chuàng)造條件.根據(jù)酵母偏愛密碼子重新設(shè)計(jì)apoAI cDNA,用化學(xué)法合成修改后的apoAI cDNA,并將該cDNA插入pBS SK質(zhì)粒的XhoI、EcoRI位點(diǎn).用限制酶將sBS-apoAI質(zhì)粒上apoAI cDNA切下,分別插入分泌

2、型載體pPIC9和pPIC9K.將重組的pPIC9K-apoAI用BglII酶切后,轉(zhuǎn)化Pichia pastoris GS115菌株,篩選獲得具G418高抗性的apoAI cDNA多拷貝串聯(lián)整合的轉(zhuǎn)化子.轉(zhuǎn)化子經(jīng)搖瓶發(fā)酵和甲醇誘導(dǎo),上清液用SDS-PAGE檢測(cè),有明顯的ApoAI表達(dá).經(jīng)Pheny-sepharose 6(Fast Flow)疏水層析柱和Sephadex G-50(coarse)分子篩層析,得到的ApoAI蛋白純度大于

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