臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對CIA大鼠免疫炎性易栓狀態(tài)影響研究.pdf

1、目的：課題通過臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(umbilical cord mesenchymal stem cells，UC-MSC)移植對膠原誘導(dǎo)型關(guān)節(jié)炎(collagen typeⅡ-induced arthritis，CIA)大鼠免疫細(xì)胞亞群和炎癥細(xì)胞因子分泌的影響，初步探討UC-MSC對CIA大鼠血漿凝血蛋白水平和免疫炎性易栓癥的干預(yù)作用。
　　方法：建立CIA大鼠模型：(1)分組：90只SD大鼠(Sprague-Dawley Rat

2、s)隨機(jī)分為空白對照組、模型組、UC-MSC治療組，每組30只；(2)造模：所有SD大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)于揚(yáng)州大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心清潔級環(huán)境1周后，以Ⅱ型膠原乳劑于大鼠右后足跖皮內(nèi)注射，至第21天再次于左后足跖皮內(nèi)及大鼠尾根部多點(diǎn)激發(fā)注射加強(qiáng)免疫。空白對照組以生理鹽水于相同部位注射，方法同造模組。
　　各組大鼠每周進(jìn)行一次關(guān)節(jié)炎指數(shù)(arthritis index，AI)評分，于造模后第4周，攝取大鼠關(guān)節(jié)X線片。然后處死大鼠取其關(guān)節(jié)組

3、織行蘇木素和伊紅(Hematoxylin and eosin，HE)染色觀察大鼠的關(guān)節(jié)病理。
　　造模后4周，取融合度約85％的P3代UC-MSC，經(jīng)0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA消化后，用無菌生理鹽水清洗三遍，制成濃度為2×106/ml的細(xì)胞懸液，以1ml注射器分裝成0.5ml/支(含1×106個(gè)細(xì)胞)，經(jīng)大鼠尾靜脈注射。空白對照組及模型組經(jīng)尾靜脈注射等量生理鹽水。
　　以流式細(xì)胞術(shù)(Flow cytometry，

4、FCM)檢測治療后第1、3、5周各組大鼠外周血中性粒細(xì)胞CD11b(N-CD11b)及CD4+CD25+T細(xì)胞表達(dá)水平。
　　以酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)測定各組大鼠：(1)炎癥細(xì)胞因子：血清白介素-6(Interleukin-6，IL-6)、IL-17、腫瘤壞死因子-α(Tumor necrosis factor-α，TNF-α)、基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1(Str

5、omal cell-derivedfactor-1，SDF-1)、血管細(xì)胞間黏附分子-1(Vascular cell adhesion molecule-1，VCAM-1)、內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(Vascular endothelial growth factor，VEGF)水平；(2)血栓相關(guān)指標(biāo)：血漿D-二聚體(D-dimer，D-D)、血栓調(diào)節(jié)蛋白(Thrombomodulin，TM)、抗凝血酶-Ⅲ(Antithrombin-Ⅲ，AT

6、-Ⅲ)、組織因子(Tissuefactor，TF)、纖維蛋白原(Fibrinogen，F(xiàn)IB)水平。
　　結(jié)果：CIA大鼠經(jīng)AI評分、關(guān)節(jié)X線及關(guān)節(jié)滑膜組織病理等證實(shí)造模成功。1.模型組CIA大鼠關(guān)節(jié)滑膜炎癥反應(yīng)明顯、關(guān)節(jié)軟骨及骨破壞嚴(yán)重。其外周血CD4+CD25+T細(xì)胞比例及血漿AT-Ⅲ均降低，其N-CD11b平均熒光強(qiáng)度及血清IL-6、IL-17、TNF-α、VEGF、VCAM-1、SDF-1和血漿D-D、TM、TF、FIB均

7、高于同期空白對照組(P<0.05)；2.UC-MSC治療組CIA大鼠關(guān)節(jié)炎癥反應(yīng)、關(guān)節(jié)軟骨及骨破壞減輕。其外周血CD4+CD25+T細(xì)胞比例及血漿AT-Ⅲ水平上升；N-CD11b表達(dá)水平及血清IL-6、IL-17、TNF-α，、VEGF、VCAM-1、SDF-1和血漿D-D、TM、TF、FIB水平均降低，與同期模型組比較差異顯著(P<0.05)，至UC-MSC治療后第5周結(jié)果與同期空白對照組相似(P>0.05)。
　　結(jié)論：1.C