酶母細胞自噬相關(guān)分子機制的初步探究.pdf

1、細胞自噬(Autophagy)是真核生物中高度保守的、對維持真核生物健康起關(guān)鍵作用的一類亞細胞降解途徑。自二十世紀(jì)九十年代初在酵母中展開了相關(guān)基因的篩選和細胞生物學(xué)的研究以來，其分子機制的研究已取得了很大進展，酵母也成為了細胞自噬分子機制研究最為充分的模式生物。同時哺乳動物中細胞自噬的研究也越來越受到關(guān)注，已有很多證據(jù)表明細胞自噬在生物體生長發(fā)育、免疫防御、細胞程序性死亡、腫瘤發(fā)生發(fā)展、退行性神經(jīng)病變抑制等方面有非常重要的作用。

2、　　 本論文主要研究Atg14、Atg8的分子機制，二者都是酵母細胞自噬的中心機制蛋白，其中Atg14是Ⅲ型PI3K復(fù)合物Ⅰ的組分，負責(zé)將整個復(fù)合物定位于PAS(phagophore assembly site)位點，該位點是自噬體形成的起始位點。本論文研究發(fā)現(xiàn)在氮饑餓條件下，酵母細胞中Atg14的蛋白表達會明顯上升，與此同時ATG14的mRNA水平也有明顯上升，說明引起ATG14表達變化的原因發(fā)生在轉(zhuǎn)錄水平。通過篩選潛在的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因

3、子，我們發(fā)現(xiàn)Gln3、Gzf3是ATG14表達的正調(diào)控因子。然后我們通過構(gòu)建低量表達Atg14的菌株來研究表達量對細胞自噬的作用，結(jié)果表明，在實驗條件下，表達量的上升對細胞自噬的發(fā)生不是必須的。
　　 Atg8是一種泛素樣蛋白，其與PE結(jié)合，在自噬體形成過程中，被募集到PAS，位于雙層膜結(jié)構(gòu)的兩側(cè)，調(diào)控它的延伸。當(dāng)自噬體形成之后，大部分Atg8從雙層膜上解離回到細胞質(zhì)。其到達PAS的數(shù)量可以調(diào)控自噬體的大小，是細胞自噬至關(guān)重要的

4、一個蛋白。本論文研究發(fā)現(xiàn)，Atg8在細胞質(zhì)與自噬體膜之間的正常循環(huán)是細胞自噬必須的，Atg8滯留于自噬體膜上會明顯影響整個自噬體的形成過程。研究還發(fā)現(xiàn)，Atg2-Atg18復(fù)合體在Atg8的循環(huán)中也起到重要作用，Atg1的激酶活性是Atg8從自噬體解離的關(guān)鍵信號。另外還發(fā)現(xiàn)，Atg8對Atg9的循環(huán)影響不大。
　　 綜上所述，本論文主要研究了細胞自噬分子機制的相關(guān)關(guān)鍵點，為進一步研究自噬體形成的分子機制提供一定參考。