SMAS修飾的PEGDA載電凝膠對(duì)MC3T3-E1細(xì)胞粘附和增殖的影響.pdf

1、目的：觀察甲基丙烯磺酸鈉（SMAS）修飾的聚乙二醇雙丙烯酸酯（PEGDA）水凝膠對(duì)小鼠前成骨細(xì)胞（MC3T3-E1細(xì)胞）粘附及增殖的影響。
　　方法：在PEGDA凝膠前體溶液中加入不同濃度的帶有負(fù)電荷的SMAS小分子，按水凝膠中SMAS終濃度的不同分為HG0組、HG50組、HG100組和HG200組，其中SMAS的終濃度分別為0mM、50mM、100mM和200mM，各組水凝膠前體溶液均在365nm紫外線光固化燈下照射15-20m

2、in使其完全固化，然后用直徑2mm的圓形模具制成相同大小的樣品備用。各組水凝膠樣品真空冷凍干燥噴金后在掃描電鏡下觀察其表面結(jié)構(gòu)。利用BCA試劑盒檢測各組水凝膠表面的蛋白吸附量并對(duì)比。將指數(shù)生長期的MC3T3-E1細(xì)胞接種于各組凝膠表面，分別在培養(yǎng)2h、4h、8h于倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長狀況并拍照。在2h、4h、8h時(shí)，消化、收集凝膠表面的細(xì)胞，利用細(xì)胞計(jì)數(shù)儀進(jìn)行計(jì)數(shù)，記錄各組水凝膠表面在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞粘附數(shù)。用cck8法檢測細(xì)胞在各

3、組凝膠表面的增殖情況。
　　結(jié)果：1.掃描電鏡觀察：HG0組水凝膠表面可見大量分布較為均勻的孔徑約為5-10μm的孔狀結(jié)構(gòu)，而SMAS修飾后，可發(fā)現(xiàn)有少量孔徑約為30-50μm的孔狀結(jié)構(gòu)存在，甚至有孔徑大于100μm的結(jié)構(gòu)出現(xiàn)。
　　2.蛋白吸附量的測定：隨著SMAS修飾量的不斷提高，凝膠的蛋白吸附量不斷增加。與HG0組相比，HG100和HG200組的蛋白吸附量分別提高了3.7倍和4.6倍。
　　3.細(xì)胞粘附的觀察：2

4、h時(shí)，HG0組凝膠的表面大部分MC3T3-E1細(xì)胞仍保持球形，而HG50、HG100、HG200組凝膠表面已有細(xì)胞得到初步的伸展，呈短小的梭形；4h時(shí)，HG0組凝膠的表面僅有少量MC3T3-E1細(xì)胞得到初步伸展，而HG50組、HG100組和HG200組凝膠表面細(xì)胞得到進(jìn)一步伸展，均有兩到三條短小的偽足伸出；8h時(shí)，細(xì)胞在各組凝膠表面均得到了進(jìn)一步的伸展，但HG50組、HG100組和HG200組細(xì)胞的細(xì)胞粘附量明顯多于HG0組，并擁有更好

5、的伸展?fàn)顟B(tài)。
　　4.細(xì)胞粘附量測定：在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)，隨著SMAS修飾量的增高，細(xì)胞在凝膠表面的早期粘附數(shù)量明顯多于單純PEGDA凝膠（P＜0.05），HG100組和HG200組表面的細(xì)胞粘附量顯著多于HG0組和HG50組。
　　5.細(xì)胞增殖情況的測定：隨著小分子修飾量的增加，OD值逐漸增加，HG50組、HG100組和HG200組與HG0組相比均有顯著性差異，且各實(shí)驗(yàn)組之間對(duì)比也有顯著性差異（P＜0.05）。
　　結(jié)論：