Rap1b對鼠前成骨細胞(Mc3T3-E1)成骨分化早期的影響.pdf

1、目的：Rap1b是一種Ras樣GTP酶，可參與氧化應激，通過調控多種信號通路如MAPK、B-Raf/MEK/ERK和Akt信號通路調節(jié)細胞的增殖和存活，在增殖、分化、形態(tài)形成及凋亡中起分子開關的作用，還能調控腫瘤細胞的增殖和轉移。還有研究表明Rap1b可以促進內皮遷移與血管生成，以及可以選擇性地抑制成熟破骨細胞，進而阻斷病理性骨吸收。另外，本課題組在前期研究中發(fā)現(xiàn)，Rap1b還參與斑馬魚早期胚胎發(fā)育。然而，Rap1b基因對成骨分化過程的

2、調節(jié)作用，尚無明確的文獻報導。因此，了解Rap1b的生物學功能具有重要意義。MC3T3-E1細胞是從新生C57BL/6小鼠顱頂骨中分離得到的一種前成骨細胞，已被證實其具有成骨細胞的表型分化特征。因此，本研究以鼠前成骨細胞(Mc3T3E1)為研究對象，探討Rap1b對鼠前成骨(Mc3T3E1)細胞成骨分化早期的影響，在進一步闡明其在成骨分化中的調節(jié)作用的理論基礎的研究中有重要意義。
　　方法：利用成骨誘導液誘導Mc3T3E1成骨向分

3、化，利用實時定量PCR分別檢測誘導后0、3、7d的Rap1 bmRNA的相對表達量。同時向實驗組細胞分別轉染Rap1b-mus-462和Rap1b-mus-703，4d后進行ALP染色，同時測定Rap1b的mRNA相對表達量，并對轉染后細胞中成骨指標ALP、Runx2和Osterix0、3、7d時的mRNA相對表達量進行測定。再利用劃痕實驗觀察siRNA轉染對Mc3T3E1細胞遷移能力的影響。
　　結果：Real-time PCR