大承氣湯對心臟驟停后綜合征兔模型腸道蛋白酶激活受體1和2表達(dá)的影響.pdf

1、目的:
　　 1.觀察PCAS兔模型全身炎癥反應(yīng)綜合征及重要臟器器官功能的變化情況。
　　 2.探索大承氣湯對PCAS兔模型重要臟器器官功能及炎性因子的影響。
　　 3.探索大承氣湯對PCAS兔模型腸道組織蛋白酶激活受體1（PAR-1）和蛋白酶激活受體2(PAR-2)表達(dá)的影響，以探討大承氣湯胃腸道保護(hù)作用的可能機(jī)制。
　　 方法:30只日本大耳白兔，隨機(jī)分為正常對照組、PCAS模型組和DT（大承氣湯）治

2、療組，每組10只。參照文獻(xiàn)采用氣管夾閉窒息法建立PCAS模型，DT治療組在造模成功后即以16g/(Kg.d)大承氣湯灌胃治療，其他組在同時間點(diǎn)以16g/(Kg.d)生理鹽水灌胃。
　　 兔于復(fù)蘇前及復(fù)蘇后6h、24h、48h、72h不同時間點(diǎn)采取靜脈血，檢測神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)及胱抑素C(CysC)水平，分別監(jiān)測腦、肝、腎功能情況。此外，復(fù)蘇前及復(fù)蘇后6h、24h、48h、72h行心臟彩超監(jiān)測心

3、功能。應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測血清IL-8、MCP-1水平。測量腹圍，聽診腸鳴音，監(jiān)測胃腸功能障礙情況。
　　 72小時后，用空氣栓塞法處死兔，立即取小腸、結(jié)腸，4％多聚甲醛磷酸鹽緩沖液固定制備石蠟標(biāo)本，部分置于-80℃保存?zhèn)溆谩?yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測各組兔腸組織PAR-1、PAR-2表達(dá)情況，應(yīng)用Image-ProPlus6.0軟件分析切片棕色累積光密度值（IOD值），用Mean±SD表示，反映PAR表達(dá)情況。蛋白質(zhì)印跡法(W

4、estern Blot)測定各組兔腸組織PAR-1、PAR-2蛋白表達(dá)，用Alpha軟件處理系統(tǒng)分析目標(biāo)帶的光密度值，并比較其差異。采用實(shí)時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)測定各組兔腸組織PAR-1mRNA、PAR-2mRNA表達(dá)水平，并比較其差異。
　　 結(jié)果:
　　 1、動物行窒息性心臟驟停，心肺復(fù)蘇成功率為80％，復(fù)蘇后均有高代謝綜合征，存在全身炎癥反應(yīng)綜合癥和多臟器功能障礙表現(xiàn)，證明PCAS動物模型制

5、備成功。
　　 2、大承氣湯對PCAS兔模型重要臟器器官功能的影響
　　 2.1 大承氣湯對PCAS兔心功能指標(biāo)EF的影響:PCAS模型組EF指標(biāo)在6h、24h、48h、72h時間點(diǎn)分別為55.00±1.73、54.80±2.91、55.57±1.16、57.07±1.80（單位:％），表明復(fù)蘇后心臟功能受損。
　　 大承氣湯治療后(DT治療組)EF在6h、24h、48h、72h時間點(diǎn)分別為59.13±1.97、

6、63.40±1.59、64.40±1.39、65.10±1.90(單位:％),較PCAS模型組明顯升高，其中DT治療組24h、48h、72h時間點(diǎn)EF水平與PCAS模型組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 2.2 大承氣湯對PCAS兔血清NSE的影響:PCAS模型組反映腦功能的指標(biāo)NSE在6h、24h、48h、72h時間點(diǎn)分別為9.18±0.55、15.17±0.71、13.25±0.25、10.05±1.97（單位

7、:ug/L），說明存在神經(jīng)元損傷，腦功能受損傷。
　　 大承氣湯治療后(DT治療組)NSE在6h、24h、48h、72h時間點(diǎn)分別為9.21±0.61、7.78±0.37、8.15±0.35、8.15±0.45(單位:g/L),較PCAS模型組明顯降低，其中DT治療組24h、48h時間點(diǎn)NSE水平與PCAS模型組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 2.3 大承氣湯對PCAS兔血清ALT的影響:PCAS模型組反

8、映肝功能的指標(biāo)ALT在6h、24h、48h、72h時間點(diǎn)分別為185.67±5.13、250.33±27.93、231.00±13.75、179.67±20.01（單位:IU/L），反映肝損傷在24h較顯著，72h肝功能障礙仍然明顯。
　　 大承氣湯治療后(DT治療組)ALT在6h、24h、48h、72h時間點(diǎn)分別為175.00±8.18、179.33±10.02、167.33±8.02、129.67±6.51(單位:IU/L)

9、，較PCAS模型組明顯降低，其中DT治療組24h、48h、72h時間點(diǎn)ALT水平與PCAS模型組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 2.4 大承氣湯對PCAS兔血清Cys-C的影響:PCAS模型組反映腎功能損傷的指標(biāo)Cys-C在6h、24h、48h、72h時間點(diǎn)分別為0.27±0.03、0.34±0.04、0.29±0.05、0.24±0.03（單位:mg/L），反映腎功能障礙持續(xù)時間較長。
　　 大承氣湯治

10、療后(DT治療組)Cys-C在6h、24h、48h、72h時間點(diǎn)分別為0.27±0.03、0.21±0.03、0.16±0.02、0.11±0.02（單位:mg/L），較PCAS模型組明顯降低，其中DT治療組24h、48h、72h時間點(diǎn)cyc-s水平與PCAS模型組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 2.5 大承氣湯對PCAS兔腸道功能的影響:PCAS模型組在復(fù)蘇后6h腹圍明顯升高，在6h、24h、48h、72h時間

11、點(diǎn)分別為35.47±0.51、35.77±0.25、35.17±0.21、34.33±0.77（單位:cm），反映動物存在明顯腹脹。聽診腸鳴音較復(fù)蘇前明顯減弱。
　　 DT治療組在6h、24h、48h、72h時間點(diǎn)分別為35.3±0.40、33.83±0.38、33.53±0.31、33.10±0.10（單位:cm），較PCAS模型組降低，其中DT治療組24h、48h時間點(diǎn)腹圍值與PCAS模型組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.0

12、5)。聽診腸鳴音較PCAS組腸鳴音稍增強(qiáng)。
　　 由上述結(jié)果可見，大承氣湯能明顯改善或減輕多器官功能障礙，防止MODS發(fā)展惡化。
　　 3、大承氣湯對PCAS兔模型炎性因子IL-8、MCP-1的影響
　　 3.1 大承氣湯對PCAS兔炎性因子IL-8的影響:PCAS模型在心肺復(fù)蘇后6h、24h、48h時間點(diǎn)血清IL-8水平分別為0.64±0.08、0.33±0.07、0.27±0.03(單位:ng/L)，反映血清

13、中IL-8水平升高。
　　 大承氣湯治療后(DT治療組)6h、24h、48h時間點(diǎn)血清IL-8水平分別為0.25±0.03、0.26±0.02、0.26±0.04(單位:ng/L)，較PCAS模型組明顯降低，其中DT組6h、24h血清IL-8水平與PCAS模型組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 3.2 大承氣湯對PCAS兔炎性因子MCP-1的影響:PCAS模型心肺復(fù)蘇后6h、24h、48h血清MCP-1水平

14、分別為1.02±0.08、0.81±0.11、0.70±0.06(單位:ng/L)，反映血清中MCP-1水平升高。
　　 大承氣湯治療后(DT治療組)6h、24h、48h血清MCP-1水平分別為0.73±0.12、0.60±0.04、0.56±0.05(單位:ng/L)，較PCAS模型組明顯降低，其中DT組6h、24h、48h血清MCP-1水平與PCAS模型組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 根據(jù)上述結(jié)果可

15、知，大承氣湯降低PCAS兔模型血清炎性因子IL-8、MCP-1水平。
　　 4、大承氣湯對PCAS兔腸組織PAR-1、PAR-2表達(dá)的影響:
　　 4.1 免疫組化分析結(jié)果:
　　 4.1.1 免疫組化分析PAR-1表達(dá):正常對照組、PCAS模型組、DT治療組的PAR-1表達(dá)的光密度值分別為1920.92±60.39、1527.08±84.66和2257.61±315.39。PCAS模型組PAR-1表達(dá)較正常對照

16、組表達(dá)減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。DT治療組PAR-1表達(dá)較PCAS模型組升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。DT治療組PAR-1表達(dá)較正常對照組升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 4.1.2 免疫組化分析PAR-2表達(dá):正常對照組、PCAS模型組、DT治療組的PAR-2表達(dá)的光密度值分別為1921.17±336.87、1213.24±100.58和4574.30±116.12。PCAS模型組PAR-

17、2表達(dá)較正常對照組表達(dá)減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。DT治療組PAR-2表達(dá)較PCAS模型組升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，DT治療組PAR-2表達(dá)較空白對照組升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。
　　 4.2 蛋白質(zhì)印跡法分析結(jié)果:
　　 4.2.1 蛋白質(zhì)印跡法分析PAR-1蛋白相對含量:以Actin為內(nèi)參照，檢測各組PAR-1蛋白相對含量，結(jié)果顯示正常對照組、PCAS模型組、DT治療組的PAR

18、-1表達(dá)量分別為0.25±0.04、0.14±0.03、0.38±0.06。PCAS模型組PAR-1表達(dá)較正常對照組減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。DT治療組PAR-1表達(dá)較PCAS模型組升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。DT治療組PAR-1表達(dá)較正常對照組升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 4.2.2 蛋白質(zhì)印跡法分析PAR-2蛋白相對含量:正常對照組、PCAS模型組、DT治療組的PAR-2表達(dá)量分別

19、為0.36±0.08、0.23±0.05、0.75±0.04。PCAS模型組PAR-2表達(dá)較正常對照組表達(dá)減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。DT治療組PAR-2表達(dá)較PCAS模型組升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。DT治療組PAR-2表達(dá)較正常對照組升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 4.3 實(shí)時熒光定量RT-PCR分析結(jié)果:
　　 4.3.1 實(shí)時熒光定量RT-PCR分析PAR-1mRNA表達(dá)量

20、:正常對照組、PCAS模型組、DT治療組的PAR-1mRNA表達(dá)量分別為1.00±0.02、0.24±0.03、2.13±0.07。PCAS模型組PAR-1表達(dá)較正常對照組表達(dá)減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。DT治療組PAR-1表達(dá)較PCAS模型組升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。DT治療組PAR-1表達(dá)較正常對照組升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 4.3.2 實(shí)時熒光定量RT-PCR分析PAR-2m

21、RNA表達(dá)量:正常對照組、PCAS模型組、DT治療組的PAR-2mRNA表達(dá)量分別為1.00±0.04、0.30±0.02、2.15±0.05。PCAS模型組PAR-2表達(dá)較正常對照組表達(dá)減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。DT治療組PAR-2表達(dá)較PCAS模型組升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。DT治療組PAR-2表達(dá)較正常對照組升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 上述結(jié)果顯示，PCAS模型組腸組織PAR

22、-1、PAR-2表達(dá)均較正常對照組減少，DT治療組腸組織PAR-1、PAR-2表達(dá)均較PCAS模型組升高，DT治療組腸組織PAR-1、PAR-2表達(dá)均正常對照組升高。
　　 結(jié)論:
　　 1.PCAS兔模型存在全身炎癥反應(yīng)綜合癥和多臟器功能障礙，且持續(xù)時間較長，PCAS遵循MODS發(fā)生發(fā)展的規(guī)律。
　　 2.大承氣湯降低PCAS兔模型血清炎性因子IL-8、MCP-1水平，減輕心、腦、腎、肝、胃腸的損傷，促進(jìn)PCA