大承氣湯對多器官功能障礙綜合征大鼠小腸平滑肌細(xì)胞Bcl-2和Bax表達(dá)的影響.pdf

1、背景：多器官功能障礙綜合征(multiple organ dysfunction syndrome，MODS)指嚴(yán)重創(chuàng)傷(包括休克、重型胰腺炎等)、嚴(yán)重感染、大面積燒傷、外科大手術(shù)和病理產(chǎn)科等原發(fā)病發(fā)生后，在全身炎癥反應(yīng)綜合征(systemic inflammation responsesyndrome，SIRS)的基礎(chǔ)上，同時或序貫發(fā)生兩個或兩個以上臟器功能障礙以致衰竭的臨床綜合征，是目前腹部外科患者死亡的重要原因。胃腸道作為細(xì)菌的儲

2、菌庫，被認(rèn)為是促發(fā)SIRS和MODS的始動器官與靶部位。MODS可引起胃腸運動功能受損，從而導(dǎo)致細(xì)菌移位，腸屏障功能受損。胃腸功能狀態(tài)被認(rèn)為是判斷MODS患者預(yù)后的一項重要指標(biāo)。促進(jìn)胃腸運動功能的恢復(fù)是有效地阻斷MODS向多器官衰竭(multiple organ failure，MOF)發(fā)展的有效手段。胃腸內(nèi)神經(jīng)-ICC平滑肌細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)是胃腸運動的基本單位。細(xì)胞凋亡是個體發(fā)育過程中由一系列基因控制的細(xì)胞主動死亡過程。平滑肌細(xì)胞是胃腸運動的

3、執(zhí)行者，其結(jié)構(gòu)和功能的正常對于胃腸運動有著重要意義。在平滑肌細(xì)胞中，原癌基因Bcl-2蛋白家族是重要的細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)因子，在細(xì)胞凋亡中相互聯(lián)系，相互作用調(diào)控細(xì)胞凋亡。Bcl-2(Bcell lymphoma/leukemia2)蛋白家族包含抑制和促進(jìn)細(xì)胞凋亡兩類功能相反的基因，這兩種蛋白的代表分別是Bcl-2和Bax(Bcl-2 associated X protein)。國內(nèi)醫(yī)務(wù)工作者運用中醫(yī)藥下法的代表方劑大承氣湯(Dachengqi

4、 Decoction DCQD)對MODS進(jìn)行中西醫(yī)結(jié)合防治，取得較好效果，顯示出中醫(yī)藥在MODS防治中的獨特優(yōu)勢。近代研究表明，中醫(yī)藥可從多環(huán)節(jié)、多靶點地發(fā)揮作用，能更好的從整體水平對MODS進(jìn)行干預(yù)、控制。因此深入研究MODS發(fā)病機(jī)理和大承氣湯的治療機(jī)制，對MODS的防治具有重要的臨床意義。
　　 目的：本實驗以細(xì)菌性腹膜炎致MODS大鼠模型為研究對象，觀察MODS大鼠模型小腸肌層中的Bcl-2、Bax的分布和平滑肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)

5、的改變，以及DCQD對MODS大鼠小腸肌層中Bcl-2和Bax的影響。探討MODS狀態(tài)下胃腸運動障礙的發(fā)生機(jī)制和大承氣湯防治MODS的機(jī)理。
　　 方法：健康成年清潔級Wistar大鼠100只，體重250g左右，雌雄各半，隨機(jī)分為對照組(20只)、MODS模型組(40只)和MODS+DCQD治療組(40只)。對照組動物每只腹腔注射1ml生理鹽水。MODS模型組和MODS+DCQD治療組動物每只腹腔注射1mlE.coloi.混懸液

6、，建立細(xì)菌性腹膜炎所致的MODS模型。MODS+DCQD治療組于造模前2天即給予DCQD灌胃，每次1ml/100g，2次/日。造模24小時后無菌剖腹取存活大鼠的上段小腸組織。
　　 部分小腸置于含2.5％戊二醛固定液的培養(yǎng)皿中，將組織切成1mm×2mm小塊，經(jīng)固定，脫水，浸透，包埋，制備半薄切片，光鏡定位下制備超薄切片，最后用透射電鏡觀察平滑肌細(xì)胞形態(tài)變化，采集圖像。
　　 其它小腸用甲醛固定后，石蠟包埋，用免疫組化(S

7、trept Actividin-BiotinComplex，SABC法)染色Bcl-2及Bax，然后固定封片。觀察各組小腸平滑肌細(xì)胞中Bcl-2和Bax的表達(dá)及分布情況，采集圖像，統(tǒng)計分析。
　　 結(jié)果：大體標(biāo)本和對照組相比，MODS組大鼠胃腸極度擴(kuò)張，胃腸梗阻征象明顯。MODS+DCQD治療組胃腸擴(kuò)張、梗阻較MODS組明顯減輕。
　　 透射電鏡觀察：MODS組平滑肌細(xì)胞核皺縮，胞漿內(nèi)細(xì)胞器數(shù)量明顯減少，結(jié)構(gòu)出現(xiàn)異常，超

8、微結(jié)構(gòu)受損明顯，出現(xiàn)凋亡征象。較之MODS組，DCQD治療組平滑肌細(xì)胞核形態(tài)基本正常，胞漿內(nèi)細(xì)胞器數(shù)量較多，形態(tài)結(jié)構(gòu)較為清楚，超微結(jié)構(gòu)較MODS組損傷明顯減輕。
　　 免疫組織化學(xué)檢測各組大鼠小腸平滑肌細(xì)胞胞漿內(nèi)均可見Bcl-2和Bax表達(dá)，其免疫反應(yīng)沉淀物為棕黃色，呈顆粒狀或勻質(zhì)狀。
　　 對照組 Bcl-2和Bax的免疫反應(yīng)沉淀物在縱肌層和環(huán)肌層平滑肌細(xì)胞中分布均勻，Bax的較Bcl-2陽性細(xì)胞表達(dá)稍多。
　　

9、 MODS組 Bcl-2較對照組表達(dá)強(qiáng)度無明顯差異(p＞0.05)，而Bax較對照組表達(dá)明顯增多(p＜0.05)。同組標(biāo)本Bax的表達(dá)較Bcl-2強(qiáng)烈。
　　 MODS+DCQD治療組 Bcl-2的表達(dá)強(qiáng)度均比對照組、MODS組明顯增多(p＜0.05)，而Bax的表達(dá)強(qiáng)度較MODS組明顯減少(p＜0.05)，與對照組相比無明顯差異(p＞0.05)。同組標(biāo)本Bcl-2的表達(dá)較Bax強(qiáng)烈。
　　 結(jié)論：1細(xì)菌性腹膜炎所致M