虎桂藥對(duì)組分配伍治療高尿酸血癥及其機(jī)制的探究.pdf

1、高尿酸血癥是困擾人類的眾多代謝疾病之一。大量的國(guó)內(nèi)外研究顯示，高尿酸血與許多疾病密切相關(guān)，如急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎、尿酸性腎病、高血壓、肥胖、糖尿病和心血管疾病等。伴隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)水平的高速列車，人民的生活習(xí)慣，飲食規(guī)律發(fā)生了翻天覆地的變化。夜宵、快餐文化、啤酒、飲料（含果糖）等在我國(guó)的大肆泛濫，致使我國(guó)的高尿酸血癥患者爆發(fā)式的增長(zhǎng)，并呈現(xiàn)低齡化的趨勢(shì)。嚴(yán)重影響著我國(guó)人民的身體健康以及生活質(zhì)量。目前高尿酸血癥的研究尚缺乏公認(rèn)的合理的動(dòng)物模型和安

2、全有效的治療藥物，故本次實(shí)驗(yàn)我們希望嘗試建立一種血尿酸值較為平緩、穩(wěn)定、持久、對(duì)腎臟損害小的大鼠高尿酸血癥模型，并在此基礎(chǔ)上探究虎桂藥對(duì)的組分----虎杖苷和桂皮醛相互配伍對(duì)高尿酸血癥的治療作用以及其作用機(jī)制。本研究分為兩個(gè)部分：
　　第一部分：大鼠高尿酸血癥模型實(shí)驗(yàn)。
　　目的：優(yōu)化次黃嘌呤，氧嗪酸鉀，乙胺丁醇三種藥物聯(lián)合制備大鼠高尿酸血癥模型的使用劑量，以期得到更合適的大鼠高尿酸血癥模型。
　　方法：雄性SD大鼠3

3、2只，隨機(jī)分為4組，每組8只。模型Ⅰ組：給以灌胃75mg/kg次黃嘌呤和250mg/kg鹽酸乙胺丁醇，皮下注射200mg/kg氧嗪酸鉀（1次/d）。模型Ⅱ組：給以灌胃75mg/kg次黃嘌呤和250mg/kg鹽酸乙胺丁醇（1次/d），皮下注射100mg/kg氧嗪酸鉀（1次/12h）。模型Ⅲ組：給以灌胃50mg/kg次黃嘌呤和250mg/kg鹽酸乙胺丁醇，皮下注射200mg/kg氧嗪酸鉀（1次/d）?？瞻捉M給予生理鹽水灌胃及橄欖油皮下注射。

4、連續(xù)造模24天。第4，11，18d皮下注射后6h，大鼠眼眶取血，測(cè)SUA含量。第24天皮下注射后，分別3、6、12、24h取血測(cè)SUA含量，并測(cè)6h血清中BUN、Cr的含量。大鼠處死取腎，測(cè)察其病理改變。
　　結(jié)果：與空白組對(duì)比，三組造模方式均能引起大鼠的血尿酸含量明顯上升（P＜0.01），可維持12h，尤其是模型Ⅱ組能達(dá)到24h；三組造模方式的大鼠腎臟病理切片表明，三種造模方式均能引起腎臟輕微損傷；模型Ⅰ組和模型Ⅱ組的血尿素氮含

5、量與空白組對(duì)比明顯的升高（P＜0.01,P＜0.05）。
　　結(jié)論：三種造模方式均能成功制備大鼠高尿酸血癥模型，并伴有輕微的腎臟器質(zhì)和功能損傷（尤其是模型Ⅲ組損傷最輕），具有血尿酸值增長(zhǎng)維持時(shí)間長(zhǎng)的優(yōu)點(diǎn)（尤其是模型Ⅱ組可持續(xù)24h）。
　　第二部分：虎桂藥對(duì)組分配伍對(duì)高尿酸血癥的治療及機(jī)制的探究。
　　目的：探究虎桂藥對(duì)的組分——虎杖苷（Polydatin）和桂皮醛（Cinnamaldehyde）互相配伍后，對(duì)大鼠高尿

6、酸血癥的降尿酸作用，并從尿酸的排泄和生成兩個(gè)途徑，初步探索其多靶點(diǎn)降尿酸的機(jī)理，為中醫(yī)藥治療高尿酸血癥提供新的思路和方法。
　　方法：雄性SD大鼠70只隨機(jī)分為7組?？瞻捉M、模型組、別嘌呤醇組、苯溴馬隆組、虎杖苷和桂皮醛（PC）的低、中、高組，每組10只。皮下注射氧嗪酸鉀（200mg/kg），7h后灌胃乙胺丁醇（250mg/kg）和次黃嘌呤（50mg/kg）制備高尿酸血癥大鼠模型，連續(xù)26天（1次/d）。第4天，皮下注射后6h眼眶

7、取血測(cè)大鼠的SUA值。第5天起，皮下注射前1h，灌胃治療藥，持續(xù)21天（1次/d）。第25天將大鼠放進(jìn)代謝籠，收集尿液24h，備用。最后一天皮下注射6h后，大鼠腹主動(dòng)脈取血，測(cè)定SUA、Cr、BUN和GPT的含量；取出大鼠肝，腎，小腸備用。ELISA試劑盒測(cè)定尿液中Kim-1、NGAL的含量；腎臟組織的病理學(xué)觀察，統(tǒng)計(jì)評(píng)分；qPCR測(cè)定肝臟XOD、ADA和腎臟GLUT9、URAT1、OAT1、OCT1的基因表達(dá)；Western Blot

8、ting測(cè)定肝臟XOD和腎臟GLUT9、URAT1的蛋白表達(dá)；免疫組化測(cè)定小腸MRP4的蛋白表達(dá)，分析照片陽性的累積光密度值（IOD）。
　　結(jié)果：造模后，大鼠SUA含量明顯升高（P＜0.01）。給予治療藥后，PC中、高組SUA含量明顯下降（P＜0.01，P＜0.05）；PC中組BUN含量明顯下降（P＜0.05）；PC三組的NGAL含量明顯下降（P＜0.01，P＜0.05）；PC中、高組的Kim-1含量明顯下降（P＜0.01）；P

9、C三組肝臟ADA，XOD mRNA表達(dá)明顯下降，腎臟GLUT9，URAT1 mRNA表達(dá)明顯下降，OAT1、OCT1 mRNA表達(dá)明顯上升（P＜0.01，P＜0.05）；PC三組肝臟XOD蛋白表達(dá)明顯下降，腎臟GLUT9、URAT1蛋白表達(dá)明顯下降（P＜0.01， P＜0.05）；PC中組小腸MRP4蛋白表達(dá)明顯升高（P＜0.01）；腎臟組織病理切片表明：PC中組的大多數(shù)腎皮質(zhì)腎小管上皮細(xì)胞形態(tài)正常，胞漿豐富，腎髓質(zhì)少數(shù)集合管管腔內(nèi)見紅