HCG對β1,4-GalTⅠ在調控胚胎著床作用中的影響及調控機制研究.pdf

1、哺乳動物胚胎著床包含子宮與胚胎之間一系列的同步協(xié)調的變化，是游離的胚泡與子宮內膜上皮細胞的識別、定位、黏附，進而植入子宮基質。成功著床依賴于子宮內膜接受狀態(tài)的建立與胚泡侵入性的形成，即著床窗口期。著床窗口期在雌、孕激素的調解下子宮內膜分泌的大量細胞因子、黏附分子、蛋白水解酶等著床相關因子，介導胚胎與子宮內膜的識別、黏附，進一步調控胚胎著床的進程。
　　 目的:探討人絨毛膜促性腺激素(HCG)作用下，模擬著床期子宮內膜細胞的子宮內

2、膜癌細胞（RL95-2細胞）中β1，-GalTI表達水平變化及對胚胎和子宮內膜黏附的影響，并探討與EGFR相關信號通路相關性;調控RL95-2細胞β1，4-GalTI的表達，檢測相應基質金屬蛋白酶MMPs及細胞外基質ECM表達變化，分析β1，4-GalTI對胚胎與子宮內膜黏附的影響，進一步探討β1，4-GalTI調控胚胎著床的分子機制。
　　 方法:構建體外著床模型，以人胎盤絨毛癌細胞（JAR細胞）模擬著床前胚胎，以子宮內膜癌細

3、胞（RL95-2細胞）模擬著床前子宮內膜;改變子宮內膜環(huán)境人絨毛膜促性腺激素(HCG)的水平，免疫印跡、RT-PCR技術檢測HCG對β1，4-GalTI表達的影響;免疫細胞化學染色分析HCG作用下β1，4-GalTI半乳糖基化的改變;RCA-1Lectin-blot技術分析HCG作用下Galβ1，4-GlcNAc糖鏈分支形成情況;檢測HCG影響EGFR相關信號通路蛋白表達水平;分別通過熒光顯微鏡和流式細胞技術分析RL95-2細胞和JAR

4、細胞間粘附的情況。
　　 將β1，4-GalT基因調控質粒（過表達質粒、干擾質粒）、干擾對照質粒和空質粒分別轉染到RL95-2細胞中，采用免疫熒光、RT-PCR、免疫印跡技術、免疫細胞化學染色等技術分別檢測各組轉染后細胞中β1，4-GalTI的表達情況以及對MMPs、ECM表達的影響;分別通過熒光顯微鏡和流式細胞技術觀察β1，4-GalTI對體外著床模型RL95-2細胞與JAR細胞的粘附影響;RT-PCR技術檢測HCG對β1，4

5、-GalTⅠ及MMPs-TIMP-ECM通路表達影響。
　　 結果:(1)子宮內膜細胞中β1，4-GalT-Ⅰ表達與HCG呈劑量、時間-效應關系，HCG最佳作用條件為5×10-4ug/ul、36h（P＜0.01）;(2)HCG作用下明顯上調EGFR、NF-κB、ICAM-1、EGF表達(P＜0.01);(3)HCG可促進JAR細胞對RL95-2細胞的黏附作用(P＜0.01);(4)子宮內膜細胞轉染β1，4-GalT-Ⅰ基因調控質

6、粒后，過表達組可明顯上調MMP2、MMP9，并明顯下調LN、TIMP-1，干擾組可明顯下調MMP2、MMP9，并明顯上調LN、TIMP-1(P＜0.01);(5)子宮內膜細胞轉染β1，4-GalT-Ⅰ基因調控質粒后，過表達組可明顯提高JAR細胞對RL95-2細胞的黏附作用，干擾組可使黏附作用下降(P＜0.01);(6)RT-PCR結果顯示:HCG明顯上調MMP2、MMP9表達，下調LN、TIMP-1表達（P＜0.01）。