脊椎術(shù)中出血來源間充質(zhì)干細胞不同分離方法的效果比較.pdf

1、目的：通過三種分離方法分離脊椎術(shù)中出血標本中的間充質(zhì)干細胞并進行培養(yǎng)，比較得到的單核細胞（Mononuclearcell，MNC）數(shù)、細胞貼壁情況、原代培養(yǎng)時間、傳代至第三代后得到的細胞總數(shù)，探索針對脊椎術(shù)中出血來源間充質(zhì)干細胞理想的分離培養(yǎng)方法。為進一步實驗及應(yīng)用提供實驗基礎(chǔ)。方法：以12例胸腰椎骨折病人為實驗對象。分別取術(shù)中脊椎松質(zhì)骨出血標本30ml隨機分為3等份，標記為A、B、C三組。A組采用密度梯度法，B組采用甲基纖維素（Met

2、hylcellulose，MC）沉降法，C組采用密度梯度結(jié)合甲基纖維素的兩步法分離MNC，用含10％胎牛血清的低糖DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)。72小時全量換液，以后3-5天按時換液，細胞達到匯合狀態(tài)后進行胰蛋白酶消化傳代。比較三種分離方法分離的MNC數(shù)、第三天貼壁細胞數(shù)、原代培養(yǎng)時間、第三代細胞數(shù)。倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)及生長狀態(tài)。流式細胞儀檢測細胞表面標志鑒定細胞。結(jié)果用3種分離方法提取MNC數(shù)分別為：A組（6.99±0.77）×106，B組

3、（11.5±1.70）×106，C組（8.20±0.96）×106，三組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。培養(yǎng)第三天觀察細胞貼壁數(shù)分別為：A組11.40±2.37，B組為10.10±1.91，A組與B組兩者之間的差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；C組24±3.27，與其它兩組比較有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。比較三組原代培養(yǎng)時間，A組為28.20±1.69天，B組為28.40±2.12天，A組與B組之間的差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義（P>0

4、.05）；C組為20.40±1.17天，與其它兩組比較，差別有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。傳代培養(yǎng)3代后獲得的細胞數(shù)，A組為（6.39±0.30）×106，B組為（5.54±0.42）×106，A組與B組比較沒有統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）；C組為（8.43±0.30）×106，與其它兩組比較，差別有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），三組培養(yǎng)細胞在倒置顯微鏡下觀察，細胞形態(tài)一致，均為貼壁生長的長梭形或成纖維細胞樣。流式細胞儀檢測細胞表面標志，初