人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、鑒定及其對(duì)人肺癌細(xì)胞惡性表型的影響.pdf

1、人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells，hUC-MSCs)因取材方便、易擴(kuò)增、無倫理學(xué)限制、無病毒感染的風(fēng)險(xiǎn)，近年來受到研究者的高度關(guān)注，并開始將其應(yīng)用于臨床研究。研究表明，hUC-MSCs具有潛在的組織器官修復(fù)的能力，且具有腫瘤趨向性，能夠直接抑制某些腫瘤在體內(nèi)和體外的增殖能力。本研究分離鑒定了hUC-MSCs，并在其對(duì)肺癌細(xì)胞的惡性表型影響及作用機(jī)制方面進(jìn)行了研究。

2、
　　本文首先通過組織塊法和酶消化法從人臍帶組織中分離得到原代hUC-MSCs，顯微鏡下觀察，細(xì)胞呈長(zhǎng)梭狀，放射狀或漩渦狀排列。組織塊法獲得的細(xì)胞經(jīng)傳代培養(yǎng)后，利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)志，表明所獲得的細(xì)胞高表達(dá)CD29、CD44、CD73、CD90和CD105，不表達(dá)CD34、CD45和HLA-DR;成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)15天后經(jīng)油紅-O染色有紅色脂滴出現(xiàn)，RT-PCR可檢測(cè)到PPAR-γ表達(dá);成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)21天后經(jīng)ALP染色細(xì)胞呈陽

3、性，茜素紅染色有骨結(jié)節(jié)出現(xiàn)，RT-PCR可檢測(cè)到Osteocalcin表達(dá)，表明hUC-MSCs具有向成脂和成骨分化的潛能。以上研究證實(shí)，本研究獲得的hUC-MSCs具有典型的間充質(zhì)干細(xì)胞的基本特性，且經(jīng)多次傳代后仍保持MSCs的基本特征。為了探究hUC-MSCs對(duì)人肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549和H460的惡性表型的影響，收集hUC-MSCs培養(yǎng)液上清，制成hUC-MSCs條件培養(yǎng)基(hUC-MSCs-CM)，作用于人肺癌細(xì)胞株A549和H460

4、。在分別作用24h、48h、72h后，檢測(cè)兩種肺癌細(xì)胞的增殖能力和錨定非依賴型生長(zhǎng)能力;用Transwell小室實(shí)驗(yàn)測(cè)定這兩種肺癌細(xì)胞體外遷移和侵襲能力，并用Real-time PCR檢測(cè)肺癌細(xì)胞中的促凋亡基因、凋亡抑制基因及抑癌基因的表達(dá)。研究結(jié)果表明:hUC-MSCs-CM培養(yǎng)24h、48h、72h后，A549細(xì)胞的增殖抑制率分別為62.1％、57％、43.7％，H460細(xì)胞的增殖抑制率分別為26.4％、33.4％、59.5％; A

5、549的錨定非依賴型生長(zhǎng)抑制率分別為1.92％、37.03％、56.41％，H460的錨定非依賴型生長(zhǎng)抑制率分別為48.12％、58.31％、83.73％; A549的遷移抑制率分別為64.17％、45.3％、50.78％，H460的遷移抑制率分別為66.92％、61.90％、56.42％; A549的侵襲抑制率分別為55.63％、77.06％、59.46％，H460的侵襲抑制率分別為49.29％、65.01％、56.34％。進(jìn)一步分析

6、表明，與無血清DMEM/F12培養(yǎng)對(duì)照組相比，hUC-MSCs-CM培養(yǎng)A549和H460細(xì)胞24h、48h、72h后，促凋亡基因Caspase3和Caspase9和抑癌基因RUN3和CDH1的mRNA表達(dá)量均有不同程度的升高;凋亡抑制基因Survivin和XIAP的mRNA表達(dá)量均有不同程度的降低。綜上所述，本研究分離培養(yǎng)的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞具有間充質(zhì)干細(xì)胞的基本特性并具有多向分化潛能;hUC-MSCs條件培養(yǎng)基通過影響抑癌基因和凋亡