富H2溶液對(duì)細(xì)胞及造血系統(tǒng)的輻射防護(hù)效應(yīng)研究.pdf

1、隨著原子能在國(guó)防、工業(yè)、農(nóng)業(yè)、醫(yī)療、科技等國(guó)民經(jīng)濟(jì)各領(lǐng)域的普及應(yīng)用，核能在巨大造福人類(lèi)的同時(shí)，也給當(dāng)今世界帶來(lái)嚴(yán)重的核輻射危險(xiǎn)，給人類(lèi)的健康與安全帶來(lái)了嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)。核武器的出現(xiàn)和使用給現(xiàn)代戰(zhàn)爭(zhēng)帶來(lái)了更大的威脅，擁有核武器國(guó)家的增加及核武器的加速擴(kuò)散增加了爆發(fā)局部戰(zhàn)爭(zhēng)的危險(xiǎn)。我國(guó)也是核大國(guó)，擁有核武器、核潛艇等戰(zhàn)略核力量，還有大量的核電站，因而核輻射防護(hù)在保障從業(yè)人員身體健康中具有重要的特殊地位，它在未來(lái)核戰(zhàn)爭(zhēng)、平時(shí)反核恐怖襲擊，以及核電

2、站事故應(yīng)急救援中也具有重要的戰(zhàn)略意義，加強(qiáng)核輻射損傷防護(hù)研究任重道遠(yuǎn)?，F(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)的不斷發(fā)展，放射治療已經(jīng)成為惡性腫瘤以及一些良性疾病的重要治療手段，可是輻射對(duì)正常組織的損傷，限制了放療的發(fā)展。降低輻射所造成正常組織細(xì)胞的損傷，給放射防護(hù)學(xué)家提出了新課題。探索高效、低毒的輻射防護(hù)劑始終是國(guó)內(nèi)外放射防護(hù)研究的重點(diǎn)和難點(diǎn)。
　　 電離輻射對(duì)生物體構(gòu)成的損傷，主要來(lái)自直接作用和間接作用，其中間接作用引起的損傷占輻射損傷的70％-80％

3、左右，因此輻射防護(hù)劑的研究重點(diǎn)在于緩解或者清除輻射所產(chǎn)生的大量自由基，提高機(jī)體的抗放能力，從而保護(hù)機(jī)體組織和器官免受傷害。
　　 2007年，Ohsawa等人發(fā)現(xiàn)氫氣可以選擇性減少細(xì)胞毒性氧自由基，發(fā)揮治療性抗氧化作用。從此，在世界范圍內(nèi)掀起了研究氫氣的熱潮，也正是氫氣能夠選擇性減少羥自由基引起了我們輻射防護(hù)研究者的興趣，因?yàn)樵谳椛鋼p傷中大部分損傷是有羥自由基所導(dǎo)致。因此，我們推測(cè)其具有很好的輻射防護(hù)效果。
　　 H2

4、以前又被誤認(rèn)為生理性惰性氣體，因?yàn)檠芯空哒J(rèn)為其不會(huì)與體內(nèi)的任何物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)，而且人的腸道細(xì)菌不斷的產(chǎn)生氫氣并在血液中循環(huán)。因此，低濃度的氫氣對(duì)人體是無(wú)毒副作用的。從而，它具有很好的應(yīng)用前景。氫氣是易燃?xì)怏w，具有一定的危險(xiǎn)性，將其溶于各種溶劑中再予以使用則解決了這個(gè)問(wèn)題，并可使用于臨床。
　　 而目前在國(guó)際上并無(wú)報(bào)道將氫氣用于輻射防護(hù)，電離輻射可以造成機(jī)體多種系統(tǒng)器官損傷，尤其對(duì)由增殖更新迅速的細(xì)胞構(gòu)成的組織造成的損傷更為嚴(yán)重，如

5、造血系統(tǒng)就是機(jī)體高輻射敏感組織之一。電離輻射不僅可以對(duì)造血干細(xì)胞、造血祖細(xì)胞引起抑制和破壞，也能引起骨髓血竇的損傷。在這一領(lǐng)域國(guó)際上存在著很大的空白，對(duì)于此方面的研究將填補(bǔ)這項(xiàng)空白，具有很大的研究?jī)r(jià)值。
　　 研究?jī)?nèi)容：
　　 1.富H2溶液的制備：采用特種裝置將氫氣通入生理鹽水、PBS、或培養(yǎng)基等溶液，再通過(guò)加壓倉(cāng)對(duì)其高壓（0.4MPa）加壓6個(gè)小時(shí)。摸索出較好的合成方案和技術(shù)方法。
　　 2.富H2溶液對(duì)細(xì)胞

6、的輻射防護(hù)效應(yīng)：選取淋巴母細(xì)胞（AHH-1細(xì)胞）作為研究細(xì)胞，做出細(xì)胞在不同照射劑量下的劑量存活曲線(xiàn)，分別觀察：①不同濃度的富H2溶液對(duì)相同γ射線(xiàn)照射劑量照射后細(xì)胞的防護(hù)作用。②相同濃度的富H2溶液對(duì)不同照射劑量細(xì)胞的防護(hù)作用。③相同濃度的富H2溶液不同時(shí)間給藥對(duì)AHH-1細(xì)胞存活率的影響。④富H2溶液對(duì)照后細(xì)胞乳酸脫氫酶露出率影響（LDH）。
　　 3.富H2溶液對(duì)小鼠造血系統(tǒng)的輻射防護(hù)效應(yīng)：①富H2溶液對(duì)γ射線(xiàn)照后外周血白細(xì)

7、胞（WBC）的影響②富H2溶液對(duì)γ射線(xiàn)照后骨髓有核細(xì)胞計(jì)數(shù)的影響③定量分析富H2溶液對(duì)γ射線(xiàn)照后小鼠內(nèi)源性脾結(jié)節(jié)計(jì)數(shù)的影響④分析富H2溶液對(duì)γ射線(xiàn)照后小鼠CFU-GM的影響④富H2溶液對(duì)照后血液抗氧化酶SOD、GSH的影響。⑤富H2溶液對(duì)照后血液脂質(zhì)氧化產(chǎn)物MDA的影響。
　　 4.初步探討富H2溶液的輻射防護(hù)效應(yīng)機(jī)制：分析該富H2溶液對(duì)照后細(xì)胞DNA影響，8-OHdG濃度影響等。
　　 實(shí)驗(yàn)方法：
　　 1.富

8、H2溶液的制備：參考國(guó)內(nèi)外有關(guān)文獻(xiàn)，用本實(shí)驗(yàn)室已摸索出的平臺(tái)，優(yōu)化制備方法，制備富H2溶液。
　　 2.細(xì)胞培養(yǎng)：AHH-1細(xì)胞為來(lái)源于人淋巴母細(xì)胞系的建株細(xì)胞（本實(shí)驗(yàn)室長(zhǎng)期培養(yǎng)）。細(xì)胞培養(yǎng)條件：RMPI-1640培養(yǎng)基（Hyclone 公司），10％NCS（GIBCO 公司），37℃，5％CO2，飽和濕氣，在細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育。
　　 3.細(xì)胞γ射線(xiàn)照射：用鈷－60γ射線(xiàn)照射不同劑量。
　　 4.細(xì)胞存活率測(cè)定：

9、用CCK-8 檢測(cè)不同處理細(xì)胞的存活率。細(xì)胞存活率（％）=
　　 (藥物組OD值-本底/對(duì)照組OD值-本底)×100％5.細(xì)胞凋亡分析：用熒光染色法及Annexin V/PI 雙染，流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡百分率的變化。
　　 6.外周血白細(xì)胞、骨髓有核細(xì)胞計(jì)數(shù)：采用細(xì)胞計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)。
　　 7.LDH、SOD、GSH、MDA 檢測(cè)：采用試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。
　　 8.細(xì)胞8-OHdG濃度分析：通過(guò)8-OHdG El

10、isa 試劑盒，檢測(cè)不同濃度富H2溶液對(duì)照后細(xì)胞的8-OhdG濃度影響。
　　 9.細(xì)胞DNA 檢測(cè)：通過(guò)單細(xì)胞凝膠電泳分析，熒光顯微鏡下觀察其拖尾情況，拖尾越長(zhǎng)，DNA 損傷越嚴(yán)重。
　　 10.統(tǒng)計(jì)方法：?jiǎn)谓M間比較采用t 檢驗(yàn)；多組間比較采用方差分析，數(shù)值以sd x ?
　　 表示， P＜0.05為有差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論：富H2溶液對(duì)AHH-1細(xì)胞和小鼠造血系統(tǒng)輻射損傷具有較好的防護(hù)作用，其機(jī)