基于mTOR信號(hào)通路探討艾灸抗高血壓大鼠血管損傷的應(yīng)激耐受機(jī)制研究.pdf

1、目的:本課題通過觀察大鼠mTOR蛋白、SOD、MDA、NO以及主動(dòng)脈形態(tài)學(xué)的改變，以探索mTOR途徑在艾灸抗高血壓大鼠血管損傷的應(yīng)激耐受機(jī)制，為降低高血壓病靶器官的損傷提供新的思路。
　　方法:將12周齡的雄性自發(fā)性高血壓大鼠隨機(jī)分為:模型對(duì)照組、麥粒灸組，每組10只。另取10只同周齡京都威斯特大鼠(WKY)設(shè)為空白對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)干預(yù)前，先測(cè)量每只大鼠血壓，并記錄。各組相同環(huán)境飼養(yǎng)。模型對(duì)照組、空白對(duì)照組不施灸，麥粒灸組于每天同一時(shí)

2、間段取雙側(cè)“足三里”“曲池”進(jìn)行麥粒灸治療，每穴灸5壯，每日1次，共28天。末次施灸結(jié)束，再測(cè)各組大鼠血壓，并記錄。測(cè)完血壓后，采用眼眶后靜脈叢采血的方法收集取所有大鼠血液，用于測(cè)量血清中的SOD、MDA、NO含量。采完血后，處死大鼠，先灌洗取心臟，再取胸主動(dòng)脈，于4％甲醛中保存。各組大鼠心肌組織mTOR蛋白表達(dá)通過免疫組織化學(xué)法檢測(cè)。用HE染色及馬松染色兩種辦法觀察各組大鼠胸主動(dòng)脈形態(tài)學(xué)的改變。
　　結(jié)果:1.血壓:實(shí)驗(yàn)前當(dāng)大鼠

3、12周齡時(shí)，模型對(duì)照組血壓高于空白對(duì)照組(P＜0.01)[194.51±9.75mmHgvs122.09±7.61mmHg，麥粒灸組血壓高于空白對(duì)照組(P＜0.01)[192.49±11.17mmHgvs122.09±7.61mmHg]模型對(duì)照組和麥粒灸組血壓無(wú)差異(P＞0.05)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，麥粒灸組血壓低于模型對(duì)照組(P＜0.01)168.54±8.31mmHgvs241.90±7.34mmHg]。
　　2.各組大鼠血清中SO

4、D含量:與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組血清中SOD含量下降(P＜0.01)[95.95±6.53U/mlvs47.54±4.10U/ml];與空白對(duì)照組比較，麥粒灸組SOD含量下降(P＜0.01)[95.95±6.53U/mlvs76.63±6.48U/ml];與模型對(duì)照組比較，麥粒灸組SOD含量增多(P＜0.01)[47.54±4.10U/mlvs76.63±6.48U/ml]。
　　3.各組大鼠血清中MDA含量:與空白對(duì)照組相比

5、，模型對(duì)照組MDA含量升高(P＜0.01)[0.50±0.14nmol/mvs2.01±0.15nmol/m];與空白對(duì)照組相比，麥粒灸組MDA含量升高(P＜0.01)[0.50±0.14nmol/mvs0.83±0.10nmol/ml];與模型對(duì)照組相比，麥粒灸組MDA含量下降(P＜0.01)[2.01±0.15nmol/mlvs0.83±0.10nmol/ml]。
　　4.各組大鼠血清中NO含量:與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組血

6、清NO含量下降(P＜0.01)[77.76±6.08umol/Lvs47.30±7.05umol/L];與空白對(duì)照組比較，麥粒灸組NO含量下降(P＜0.01)[77.76±6.08umol/Lvs68.80±6.57umol/L]與模型對(duì)照組相比，麥粒灸組NO含量升高(P＜0.01)[47.30±7.05umol/Lvs68.80±6.57umol/L]。
　　5.用免疫組織化學(xué)的方法測(cè)mTOR表達(dá)的結(jié)果:與空白對(duì)照組相比，模型對(duì)

7、照組大鼠mTOR蛋白表達(dá)減弱(P＜0.01)。與空白對(duì)照組相比，麥粒灸組大鼠mTOR蛋白表達(dá)減弱(P＜0.01)。與模型對(duì)照組相比，麥粒灸組大鼠mTOR蛋白表達(dá)增強(qiáng)(P＜0.01)
　　6.HE染色:空白對(duì)照組:大鼠主動(dòng)脈形態(tài)未見異常，由內(nèi)到外可見血管內(nèi)膜光滑，中膜無(wú)增厚，分層清晰，血管平滑肌細(xì)胞形態(tài)正常。模型對(duì)照組:血管中膜增厚，血管平滑肌細(xì)胞增生且排列不整齊，內(nèi)皮細(xì)胞的形態(tài)和排列均不規(guī)則，提示大鼠主動(dòng)脈已出現(xiàn)血管損傷。麥粒灸組

8、:主動(dòng)脈內(nèi)膜增生不明顯，有內(nèi)膜脫落現(xiàn)象;中膜彈性纖維不規(guī)則，部分出現(xiàn)斷裂，中膜無(wú)增厚，平滑肌細(xì)胞形態(tài)正常。
　　7.馬松染色:空白對(duì)照組大鼠血管膠原纖維幾乎沒有，模型對(duì)照組大鼠中膜可見大量膠原纖維，麥粒灸組膠原纖維較少。血管纖維化率:與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組纖維化率升高(P＜0.01)[7.64±3.21％vs35.87±10.80％];與空白對(duì)照組比較，麥粒灸組纖維化率升高(P＜0.01)[7.64±3.21％vs14.18