高血壓病人血清中抗AT1受體抗體介導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞增殖的信號(hào)通路研究.pdf_第1頁(yè)
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1、目的:研究高血壓病人血清中抗AT1受體自身抗體(AT1-AA)類(lèi)似血管緊張素II(AngII)致大鼠血管平滑肌細(xì)胞(RVSMC)增殖效應(yīng)中胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。
   方法:大鼠胸主動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)及鑒定。同時(shí)將收集到的抗AT1受體抗體陽(yáng)性的高血壓病人血清經(jīng)硫酸銨沉淀粗提、免疫親和層析法純化,ELISA法檢測(cè)其滴度。設(shè)立不同的對(duì)照組用BrdU試劑盒檢測(cè)AT1-AA及AngII等致細(xì)胞增殖的情況。另外,用AT1-AA刺激后的細(xì)胞

2、裂解提取總蛋白,經(jīng)Western印跡方法分析胞內(nèi)JAK/STAT及NF-κB信號(hào)分子激活及表達(dá)狀況,用凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)(EMSA)檢測(cè)NF-κB的轉(zhuǎn)錄活性。
   結(jié)果:0-24h內(nèi)AT1-AA所致的血管平滑肌細(xì)胞增殖效應(yīng)類(lèi)似于AngII,尤其以12h內(nèi)明顯,其在450nm處OD值A(chǔ)T-AA組(0.236±0.0118)較其他處理組高:AG490+AT1-AA組(0.176±0.0088)、PDTC+AT1-AA組(0.172±0.

3、0096)、Losartan+AT1-AA組(0.119±0.0059)及Serum Free組(0.127±0.0064)。Western blotting結(jié)果顯示:AT1-AA刺激組中NF-κB及磷酸化的JAK2,STAT1和STAT3分子表達(dá)水平比對(duì)照組升高明顯;核蛋白中NF-κB表達(dá)在15 min和120 min最高而總蛋白中STAT1及STAT3分別在30 min和15 min處達(dá)峰。AT1-AA作用后STAT3的激活比STA

4、T1更穩(wěn)定且重要,其中峰值處pSTAT1/STAT1和pSTAT3/STAT3的相對(duì)灰度比分別是0.387±0.0114和0.734±0.0018。并且AT1-AA介導(dǎo)的上述信號(hào)分子表達(dá)的增加可以被Lorsatan、AG490、PDTC所抑制。EMSA提示AT1-AA和AngII所致NF-κB的轉(zhuǎn)錄活性激活都較空白對(duì)照組,Losartan組及PDTC組增加。
   結(jié)論:研究表明純化的高血壓病人血清中AT1-AA可通過(guò)AT1受體

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