組蛋白特定甲基化位點(diǎn)突變對完整及第二結(jié)構(gòu)域缺失的ELP3轉(zhuǎn)錄功能的影響.pdf

1、EFFECTIONSOFHISTONESPECIALSITESMETHYLATIONCHANGESONTRANSCRIPTIONFUNCTIONSOFCOMPLETEANDTHESECONDSTRUCTUREDoMAINFLAWELP3ADissertationSubmittedtotheGraduateSchoolofHenanNormalUniversityinPartialFulfillmentoftheRequirementsf

2、ortheDegreeofMasterofScienceByWangYanfangSupervisor：ProfLiFenMay2011‘‘Iflllflllflrllll／IJllIIIllllfY1960331摘要目的：酵母Elongator復(fù)合物由6個亞基組成，它作為一個具有組蛋白乙酰基轉(zhuǎn)移酶(histoneacetyltransferase，HAT)活性的復(fù)合體，協(xié)助高度磷酸化的RNA聚合酶II(RNApolymeraseII，

3、RNAPII)參與SSA3、GALl等基因的轉(zhuǎn)錄延伸過程。Elp3是高度保守的組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物Elongator的催化亞基，其亞基C端的保守區(qū)是組蛋白乙?；D(zhuǎn)移酶活性結(jié)構(gòu)域，在N端存在第二結(jié)構(gòu)域一潛在的組蛋白去甲基化酶活性結(jié)構(gòu)域。多數(shù)研究結(jié)果表明Elp3作為一個HAT協(xié)助RNAPII參與GAL!、SSA3等基因的轉(zhuǎn)錄延伸過程?！芯勘砻鹘湍窫lp3的N端SAM類似結(jié)構(gòu)域可能與甲基化有關(guān)，但另外的研究者認(rèn)為該結(jié)構(gòu)域不具有催化活性，

4、而與完整復(fù)合物的形成有關(guān)。目前尚不確定Elp3是否擁有生物信息學(xué)推測的組蛋白去甲基化酶活性，也不清楚Elongator轉(zhuǎn)錄功能與組蛋白甲基化有何關(guān)聯(lián)。為了解組蛋白甲基化時完整及N端結(jié)構(gòu)域缺失Elp3是否參與GALl、SSA3基因的轉(zhuǎn)錄，確定Elp3轉(zhuǎn)錄功能與組蛋白特定位點(diǎn)甲基化的關(guān)系。本文以特定甲基化位點(diǎn)突變(H4K20、H3K79、H4K20／H3K79)elp3A菌株為實(shí)驗(yàn)材料，通過染色質(zhì)免疫沉淀實(shí)驗(yàn)確定組蛋白特定甲基化位點(diǎn)突變對完

5、整及第二結(jié)構(gòu)域缺失Elp3轉(zhuǎn)錄功能的影響。這些研究對于建立酵母Elongator通過表觀遺傳修飾參與基因表達(dá)調(diào)控的模型，進(jìn)一步研究人Elongator功能、探索與其功能異常相關(guān)的疾病的發(fā)生機(jī)理具有重要意義。方法：本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用Elp3抗體對轉(zhuǎn)入Elp3系列質(zhì)粒的組蛋白突變elp3A菌株進(jìn)行染色質(zhì)免疫沉淀，以InputDNA和沉淀DNA作模板進(jìn)行特異引物的PCR，確定特定組蛋白甲基化位點(diǎn)突變對完整及第二結(jié)構(gòu)域缺失的Elp3轉(zhuǎn)錄功能的影響。結(jié)果